作者csmceddie (eddie)
看板Biotech
標題Re: [求救] 請問DIG High Prime DNA Labeling and …
時間Thu Mar 20 20:22:19 2008
※ 引述《bbiioo (梅子)》之銘言：
: 初次使用DIG High Prime DNA Labeling and Detection starter Kit這套kit
: 不知板上有沒有人用過這一套southern blotting的kit
: 想請教一些問題
: 1.Probe labeling的製作，label後的probe是不是一定要馬上開始進行hybridization??
: 沒用的可以保存多久呀??
可以保存在-20度
可以一直reuse到probe沒了為止
: 2.進行transfer時，如何使我的模板dna變性??
: 我的DNA是經由酵素切割後的Cchromosome DNA@@
: 有人建議跟我說~是在transfer buffer中加NaOH，不知道這樣行不行??
denaturating buffer: 0.5N NaOH, 1.5M NaCL
有人直接用這個buffer做transfer
不過做DIG是不建議這樣做
所以會再用neutralizing buffer中和
之後用SSC做transfer
: 3.pre- hybridization後呀~是否要將多餘的Dig Easy Hyb洗掉才能進行接下來的步驟??
: 要洗~那要用什麼洗呢??因為他說明書沒寫到~所以還蠻疑問的!!
不用洗
probe也是加在這裡面
: 以上問題~感謝大家花時間看~
: 麻煩幫我解答一下~
: 感激不盡唷
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◆ From: 140.109.40.55
1F：推 Istyle:為什麼不建議用NaOH/NaCl做transfer阿？ 03/20 21:15
2F：→ Istyle:最後transfer完之後不是可以在用2XSSC wash然後cross-link? 03/20 21:16
3F：→ csmceddie:效果比較差 DIG system如果要做single copy gene 03/20 21:19
4F：→ csmceddie:要用SSC transfer才做的出來 03/20 21:22
5F：→ bbiioo:老闆建議用0.4N NaOH....先做看看羅~~不好的話再改 03/20 23:45