作者AS1 (AS1)
看板Biotech
標題Re: [求救] real-time pcr的問題
時間Sat Feb 16 21:41:32 2008
※ 引述《latte366 ( )》之銘言：
: ※ 引述《AS1 (AS1)》之銘言：
: : 現在的問題是這台機器跟我沒關係
: : 因為要是我的話 我絕對不會買
: : 但問題是現在買了
: 個人淺見:
: 再下覺得最大的問題不是機器
: 而是閣下的心態
我是來幫別人抱怨 不是我自己
因為我碰一次之後 我就不想碰了
更何況 我工作是跑現場
: 如果所有生技人非用過的機器不做
: 或者有實驗做不出來就怪當初為何要購買
: 那台灣的生技業就真的只是如此而已
: 就您所說 對方specilist來上第二次課的時候您已接手這份工作
: 那不是就該虛心求教 為何會躲得遠遠的 連聽都不想聽呢
: 況且操作手冊您也是有 居然會連翻都不想翻!?
我不是接手此工作 接手此工作的是學姊
但新人 你能給他多少工作 我變成在旁邊無所事事 別人都再忙 我會不好意思
: 就您前文的敘訴 您真的了解melting curve 的意義是什麼嗎
: 如果原理都沒搞懂 就想上機 出了問題才來怪公司為何要買妳不會用的機器
: 那我會嚴重懷疑閣下公司的人事遣派制度有無問題
我不了解 我也不想懂
真的要懂 我要拿雙碩士才想學
: 當初面事時有無雙方溝通好工作內容
我工作是跑現場
: 方便透露一下公司嗎 地雷別讓後面的人也踩到
台南的公司 今年過年分紅三個半月
但我七月一號以後才進
沒有分到
: : 130萬的機器 跑不出要的產物
: : RT-PCR產物可能再兩百多 結果去跑REAL-TIME PCR 結果都變成三百以上 甚至更高
: : 不然就是沒有BAND
: : 關於羅氏的售後服務
: : 我們幾乎每周打電話過去(每週三通以上) 就是要她們來上機試做看看
: : 結果都要三催四請
: : 現在直接跳過技術專員 直接打給經理
: : 因為技術專員時間很難等
: 我做過ABI 也做過Roche的儀器
: 個人覺得 ABI的售後服務的確是很棒!
: 但是Roche的也沒像閣下說的那麼差
: 請問距離上次閣下請他們來上機 到現在隔多久呢?
機器四月買的
四月教學
第一次上機六月
我八月進公司
十月再跑一次
之後就難叫
: Roche不是只有貴公司一家客戶
: 講一句較不中聽的話
: 研究設備 動輒3、4百萬以上的儀器比比皆是
: 不是買了個130萬的儀器就可以等人來做好自己份內該會的事了
可以不要建議我們買 就沒事了 買了 要負責上機
不然幹麻買
買一台做不出東西的機器幹麻
: 套句星爺的話 "實驗，不是這樣做的"
: 個人建議您先將實驗原理 儀器操作步驟弄懂
: 以及格下檢體的前處理步驟弄清楚有無問題
: 包括RNA的萃取、RNA 260/280 ratio、RT的步驟、tranditional PCR、電泳
: reagent有無汙染...etc
前文已說 做RT-PCR做的出來 做REAL-TIME PCR 就算很純 也未必出的來
: 實驗是一環扣一環的
: 在下雖然沒有這裡前輩豐富的實驗經驗及理論背景
: 不過還是私以為實驗往往最大的問題不是來自機器
: 而是操作這些實驗的人的步驟
: 而且troble shooting
: 本來就是該從自己能解決且最有可能的地方先做起
: 難不成閣下真的有把握換了台儀器結果就一定很漂亮的出來??
: : 前面說到要很純的樣本 羅氏會不知道我們需要的目的嗎
: : 賣機器的不會問對方需要什麼嗎 就直接賣嗎
: 很純的樣本不是問題
: 難到隨便拿個ㄚ哩布達的東西跑得出來您會很高興?
: 假設是抽RNA 純度當然是越純越好ㄚ
: 這跟對方需不需要知道您的目的是兩碼子事
: 您的實驗要用到什麼樣的儀器
: 本來就是自己該要先做功課 再去和廠商做洽詢
: : 這台機器買的人 不是我 以前學校有 但是在養蚊子
: 別一直強調買的人不是您
: 我猜您的實驗室 有90%以上買的東西不是您
: 那您的學校還真有錢
: 可惜了那台儀器
: 如果是Roche的lightcycler那台真的不錯用
: 操作得當 可為您省下不少寶貴時間
: : 如果說要很純的樣本 羅氏幹麻要我們買
: : 他有英文的說明書 但我連看都不想看
: : 之前上面的要我做 我都一直推掉 現在換學姊做
: : (因為有碰過那台機器只有我跟她 機器在她進公司之後買
: : 在我進公司之前買 要是我一定阻止下來 )
: : 我不做是因為我不會做 她們來上課 我學校還沒畢業 也都還沒進入那家公司
: : 一年做不到兩百各檢體 不知道為什麼要買那台機器
: 這裡不綴訴 上面提過了
: 請您心態要調整一下
我工作不是做實驗室 跑現場 你可能前文沒看清楚 不綴訴
: : 有本事賣 就要有本事建立環境給人家不是嗎
: : 這台機器採購 我還沒進公司
: : 真正做的都是底下的 有權購買的人 通常都是給意見 但不是第一線人員
: 還是那句話 請別強調機器買時您還沒進公司
: 現在的日本人也會說南京大屠殺時他還沒出生ㄚ.....(什麼跟什麼 這是廢話!)
我在 我一定擋下來
: : 如果有人可以來台南幫我們做
: : 我們願意給車馬費 而不是像羅氏的人 你應該怎麼怎麼做
: : 對不起 都試了 做不出來
: 您不妨把您試過的條件 過程寫清楚
: 說不定有些部分是您沒注意到
: 我想板上很多有經驗的前輩會不吝給您指教
: 至於想要請人代做 雖然那也不失一個方法
: 不過我只能說..
: 實驗還是您自己的 盡可能得靠自己去完成他會有很大的成就感
: 現在有這個版面是讓大家線上討論
: 如果真有那麼好心的人 願意幫忙人代做實驗
: 我想我會很想發給他一張卡........(您真是個大好人ㄚ~~~~~~~)
這各實驗跟我一點關係都沒有
我完全不想碰這台機器是因為
在動物體內檢測出極少量的病毒有意義嗎
會致病 我只相信一般的PCR
說難聽一點
REAL-TIME PCR 我不認為會贏一般的PCR
拜託人來做是因為
專家都做不出來了 更何況我們
羅氏的小姐來 也不是每各SAMPLE都出的來
還是先跑完RT-PCR才跑REAL-TIME PCR
這有什麼意義
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 122.123.96.155
※ 編輯: AS1 來自: 122.123.96.155 (02/16 21:42)
※ 編輯: AS1 來自: 122.123.96.155 (02/16 21:51)
1F：推 aggaci:QPCR優點在於可以定量...你ㄧ般PCR要定量可以，你知道多麻 02/16 21:56
2F：→ aggaci:煩嗎？說你不懂就你回去查資料還ㄧ直發牢騷...切~ 02/16 21:57
3F：→ AS1:請問我哪裡有說要定量 我們只要跑膠有或沒有 切 02/16 21:59
4F：推 latte366:可以請您學姐直接來這發問嗎? 感覺妳是來亂的! 02/16 22:18
5F：→ latte366:又說自己不想學 來抱怨的 您走錯版了吧! 02/16 22:19
6F：→ latte366:學習的動機沒有 發問的禮節也沒有 02/16 22:20
7F：→ latte366:a大的意思事告訴您qPCR的優點 別搞不清楚不同機器的優缺 02/16 22:21
8F：→ latte366:就斷言一台機器很爛! 如果您只是來抱怨不做定量幹嘛用到 02/16 22:22
9F：→ latte366:qPCR 那您真的走錯地方了 麻煩按"<-"左轉 謝謝! 02/16 22:24
10F：→ AS1:我只是把我遇到的情形寫出來 學習動機沒有 02/16 22:35
11F：→ AS1:學愈多 做死的是自己 請問我前幾篇哪裡沒禮節 02/16 22:36
12F：→ AS1:前面就已經說跑膠產物大小不對 一直跟我提定量 要定什麼 02/16 22:37
13F：→ AS1:latte366 你說話也是反諷 別以為別人看不懂 02/16 22:39
14F：推 Proteomics:你請你學姐上來問~ 版上很多人認為你是來亂的! 02/16 22:56
15F：推 a64toto:原po是不是公務員啊?只有公務員才會"分工"這麼仔細... 02/16 22:59
16F：→ a64toto:如果是民間的公司或助理...我是你老闆的話一定馬上開除你 02/16 23:00
17F：推 a64toto:多做多錯..少做少錯..那不做就沒錯啦,何必問那麼多 02/16 23:02
18F：→ a64toto:不是您負責的事情就不要管啦,問那麼多幹嘛... 02/16 23:03
19F：→ AS1:因為做不出來 連帶也會被拖下水 請問開除的理由是??? 02/16 23:19
20F：→ AS1:公司換總經理 第一年 所以分紅三各半月 打破40年 02/16 23:21
21F：→ AS1:總經理說 公司只問你功勞 不問你苦勞 02/16 23:21
22F：推 a64toto:既然會被拖下水,那建議您還是積極一點比較好 02/16 23:22
23F：→ AS1:試八個月 耗材六萬 機器130萬 沒有做出來 02/16 23:22
24F：→ AS1:問題是我跑外面 不是做實驗室的工作 02/16 23:23
25F：→ a64toto:千萬不要半桶水響叮噹啊..哪天機器壞掉說是你用壞的就完了 02/16 23:23
26F：→ AS1:現在是有做出來 她的功勞就最大 所以才會請羅氏專員來 02/16 23:24
27F：→ AS1:問題是羅氏都不來 所以現在改天天打電話去盧經理 02/16 23:25
28F：→ a64toto:一般學校都是要經過認證才能使用的 02/16 23:25
29F：→ AS1:如果只看說明書就做的出來 技術專員 還要請嗎 02/16 23:26
30F：→ AS1:我待過兩個學校 大學和研究所 屏科和中興 從來沒聽過 02/16 23:27
31F：→ AS1:REAL-TIME PCR 拿來做診斷 這就是我超幹羅氏的原因 02/16 23:28
32F：→ AS1:如果人有用 那是我孤陋寡聞 那我們是動物用 02/16 23:30
33F：→ AS1:而且診斷是不收錢 是賣飼料的售後服務 02/16 23:30
34F：→ AS1:因為動物生病會賴飼料和疫苗公司 02/16 23:34
35F：→ AS1:會有症狀出現 可是RT-PCR或PCR做不出來的嗎 02/16 23:35
36F：推 bluecsky:好啦我們都了解你的重點了..羅氏很爛售後很差..花了130萬 02/17 09:32
37F：→ bluecsky:結果居然沒幫你把實驗做出來..130萬應該連paper都要幫你 02/17 09:33
38F：→ bluecsky:寫好發好..real-time PCR不可信..直接做PCR就好了 02/17 09:33
39F：→ bluecsky:反正這也不是我的事..我是跑野外的..做不出來跟我無關 02/17 09:34
40F：→ bluecsky:他來教我也不想學..反正我就超幹羅氏..這不是我的問題 02/17 09:35
41F：→ bluecsky:是羅氏的錯..我也不想學..花了130萬就應該把paper都給我 02/17 09:35
42F：→ bluecsky:寫好直接放到我桌上..反正我也不是來抱怨的 02/17 09:35
43F：→ bluecsky:以上是重點整理 02/17 09:36
請問你哪隻眼睛看到我們的檢驗報告要發PAPER
檢驗報告反而不能發PAPER
這就跟瘦肉精原理是一樣的
你發了只會害死養殖戶
所以請你眼睛看清楚
不然給你兩千加車資 你來台南做
做出來就兩千加車資
做不出來 就付你車資
否則 我比你更會打嘴砲
提供你新KIT
44F：推 lyuching:推樓上XD 原po根本不是來求救 是來發洩的吧 02/17 12:54
45F：推 penguinpeng:哪要po黑特版嗎?我也覺得原po的態度實在...唉~~ 02/17 13:07
46F：推 penguinpeng:我想你應該試著跟你學姐一起想辦法解決這問題 02/17 13:10
47F：→ penguinpeng:而且如果有症狀就表示有感染,有感染就表示應該有病原 02/17 13:11
48F：→ penguinpeng:病原抓不到就應該試試其他工具 02/17 13:13
49F：→ penguinpeng:原始一點也OK,這樣你就更能發現它們的機器有甚麼問題 02/17 13:14
就是因為用PT-PCR或一般PCR做的出來
REAL-TIME PCR做不出來(所用的檢體來源都一樣)
盧她們來解決 又不來
那買要幹麻
她們來也未必做的出來 有些樣本有出來 有些沒出來
可是這些都是用RT-PCR確認是陽性的
50F：→ penguinpeng:在版上抗議人家公司有用嗎? 02/17 13:14
51F：推 penguinpeng:我那時做純化用TFF濾膜用機器做完整性測試也老做不過 02/17 13:18
52F：→ penguinpeng:最後用最原始的方式做確定濾膜有破 02/17 13:19
53F：→ penguinpeng:廠商還不是一直覺得我們新拆的濾膜怎麼可能破 02/17 13:20
54F：→ penguinpeng:其他同事也是跟我一起想辦法啊...抱怨沒有用的... 02/17 13:21
※ 編輯: AS1 來自: 122.123.96.155 (02/17 13:32)
55F：推 MrCAKE:AS1都說他很會打嘴砲了 板友就別理他了 02/17 14:09
56F：→ MrCAKE:讓他一個人打嘴砲打到死吧 02/17 14:10
57F：→ AS1:感謝抬愛 02/17 14:50
58F：推 qqo8855436:bluecsky summy的很棒 故推 02/17 14:56
59F：→ qqo8855436:就算有版友在台南也不會想為了車馬費去幫你做 02/17 14:58
60F：→ qqo8855436:經驗無價 如果有人做的出來 你憑啥領那份薪水 02/17 14:58
他做的出來 或做不出來 跟我的薪水 一點關係都沒有
我反而想把矛頭指向羅氏
一台做不出東西的機器 推銷他幹麻
現在只有兩個人上機過
再加其他人 第三人 第四人 第五人 還是做不出東西
更可以 怪罪於羅氏
到底這台機器好在哪
新車都有一年 三年的保固
到四月滿一年 DATE =0
比車貴 貴到沒人知道怎麼解決
你要說這個課程度濫也可以 六人有四人有國立碩士學位
61F：推 Jaden:幫人出頭很簡單 幫人解決問題很難 語氣上尊重一下熱心的前輩 02/17 15:15
62F：→ Jaden:有很難嗎? 02/17 15:16
63F：推 soom:請各位板友冷靜阿 please 02/17 15:22
※ 編輯: AS1 來自: 122.123.96.155 (02/17 15:58)
64F：推 aggaci:如果你跟洛是他們講話也是這種口氣，他們不甩你我也不覺得 02/17 16:36
65F：→ aggaci:意外，有問題請教於人請虛心、低姿態，即使你是花錢的那方 02/17 16:37
66F：→ aggaci:打錯...是羅氏 02/17 16:39
我只打過一通 之後就懶的打了 因為做過一次 不好做
就打給她們問理由 她們就說試什麼 試什麼
趕緊跳開 因為課長說 想辦法解決 難解決阿
就趕緊跑現場
另一個學姊打50通以上 我進公司後 來兩次
一次約九點 12點才來
一次約九點 九點做到四點多才離開
結論是 你們的來源太雜 所以 REAL-TIME PCR會亂黏
就陷入無止盡的回圈 請問樣本太雜
在買之前 她們就應該知道我們要做什麼樣本了吧
現在我都不出意見 以免讓人說 你出意見 怎麼自己不去做
現在是 一般RT-PCR先轉cDNA 再拿出來跑
我提意見不被採納 就放棄了
cDNA一般都做42度 一小時(我印象中)
這裡只做半小時 我就說 要不要改一下
結果得到答案是 以前做的出來 不需要改
所以放棄 纜太多事 薪水又不會增加 做死的是自己
現在只想知道 有人檢測 棄RT-PCR 改REAL-TIME PCR
如果一堆人覺得是對的 那買是對的
如果有人檢測是以RT-PCR為主 那買是錯的
先說樣本只能抽完RNA就上機(要做病毒檢測)
不可以培養
如果大家相信的是RT-PCR 叫我去幫忙 我直接說不會
如果相信的是REAL-TIME PCR 叫我去幫忙 也一定要找出答案
我們只需要跑膠 看產物有沒有
不定序 不定量
想要買其他東西的經費 都花在這台機器上 捨棄其他 換來的是一台
十各月了 WHERE ARE DATE
※ 編輯: AS1 來自: 122.123.96.155 (02/17 17:09)
67F：推 linkme:不定量 當初幹麻買? 要不要認賠殺出 問羅氏有無收購2手機器 02/18 00:22
68F：→ linkme:賣給經費不足但知道他用途的實驗室阿～ 02/18 00:24
69F：→ linkme:線在你已經在公司了 想辦法把那台弄走阿 用傳統PCR就好了~ 02/18 00:25
70F：推 albertwang:"REAL-TIME PCR 我不認為會贏一般的PCR" 呵呵 02/18 21:36
71F：推 tsubasawolfy:你到底是哪科系畢業的?看不出來是生物相關的 02/18 21:50
72F：推 niceone:我中興 一進實驗室教授就教我要自己學看原文說明書 02/19 00:01
73F：→ niceone:其實我知道實驗遇到問題又嘗試很多做不出來心裡會很幹 02/19 00:03
74F：→ niceone:但是其實看了一系列文章小弟我也看不下去 02/19 00:05
75F：推 niceone:學長要不要平心靜氣想一個具體的解決方案 02/19 00:09
76F：→ niceone:依您這種態度 我想應該沒人會願意幫您 也無從幫起 02/19 00:11
77F：→ niceone:假如有得罪請多包含 02/19 00:12
78F：推 jbking:可不可以請問你哪間學校畢業的阿 這麼弱 02/20 05:27