作者lagigi (la)
看板Biotech
標題[討論] Western blot電泳時的band很怪
時間Sun Jan 27 16:11:12 2008
最近發現電泳時 每個band跑起來都是呈不連續狀
呈現有些顆粒狀
其時在sample denature後發現sample似乎就有些沉澱物
但還是把sample全load到well中 截果就出現這個情況
我確定不是膠有問題(well也有沖乾淨,marker跑起來也沒此現像)
我記的以前有老師說過 發現sample denature後有沉殿物
就要離心 最後只要load上清液
(ps.sample前處理是+lysis buffer離心後只取上清液 所以為何denature
會有沉澱物出現 也不清處 ,有懷疑過是SB buffer是否泡的不好)
所以想請教大家 電泳時會出現這個情況的原因 要如何改進?
sb buffer是否會讓samlpe在denature出現沉澱物呢?謝謝
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◆ From: 203.73.48.149
1F：推 bluecsky:sample buffer加後煮過不是都要離心嗎? 01/27 17:42
2F：→ bluecsky:原因不是你的buffer問題..而是本身就有一些東西會沉殿吧 01/27 17:42
3F：→ bluecsky:不離心去跑都會這樣..光是load的感覺就差很多 01/27 17:43
4F：推 laboy234:sample buffer煮過都要離心 一直以來都沒有這一步 01/27 17:57
5F：→ laboy234:請問轉速跟時間各多少 謝謝(這是我第一次聽到的必作步驟) 01/27 17:58
6F：推 bluecsky:我是用全速(約16k G)離心5min啦..我一開始學就被教一定要 01/27 18:16
7F：→ bluecsky:做這一步說?..是很奇怪嗎?每次離後底部都有一些沉澱沒錯 01/27 18:17
8F：→ bluecsky:而且我也試過沒離心就用就真的會怪怪的.. 01/27 18:17
9F：→ bluecsky:不管是load的感覺跟跑的結果都有差 01/27 18:18
10F：推 laboy234:那定量後的CONTROL組 準嗎 01/27 19:52
11F：推 yuchipeter:你的sample buffer有沒有加SDS and DTT 有加會好一點 01/28 09:38