※ 引述《[email protected] (工作有夠忙)》之銘言： : 想請教大家一些問題 >< : 今天壓western很怪，五分鐘、十分鐘 都一片空白，就狠下心給他壓了3小時， : 結果整片MEMBRANE都黑了，但跑出了一堆一條條白色的bands，好像位置又是我要的 : protein @@ 見鬼，怎麼變成白色的呢？ 對了 連marker也變成白色的 : 和同學討論結果可能是：二抗太強，把ECL在壓片前就吃光光，可以解釋為何第一次壓 : 沒壓出來但長時間壓卻變白色的（被HRP吃掉以致於正確位置的protein無法顯色） 是有可能 不過這也太強了吧 @.@ : 不過好怪喔～如果說是我要target的protein還解釋的通，為何pre-stain也變白的@@? 有些 protein marker 會黏抗體 (無奈) : 另外想請教大家： : 如果壓不好，壓不出東西，或挑錯壓片的時間點，再加ECL去壓還壓的出來嗎？ : 很懷疑在membrane上的HRP是不是真的還能用？ : 因為我之前做ELISA有種經驗，就是不小心錯過顯色時間，沒測到linear OD的範圍， : 想說：好吧！反正enzyme還是在盤子上，應該還有用，結果加下去就不呈色了！不然就是 : 呈色的時間拉長，或是沒辦法變的跟第一次加的時候一樣強..大家有這種經驗嗎？ : 小好奇～就是像這些顯色的enzyme，是不是作用後之後就失效，或是大幅降低酵素能 : 力了呢？ : 感恩 >< HRP 是 peroxidase 會一直找 H2O2 來吃，所以不會這麼快失效 我的經驗是一兩小時內都沒問題 不過洗過一次 membrane 再加 ECL 會好一些 大概跟佔據 enzyme 位置的東西有關 <然而>強度可能會有差異 如果要定量的話要小心一些 -- 上Ptt3的理由, 1. 不太有人管. 小站自治. PttLaw板都砍掉了. 2. 開板很快. 因為沒人申請. NewBoard板生意冷清.. 3. 不會遇到無聊人. 大都是海外留學生. 4. Ptt3==自由 本站所在地 不受中華民國各級法令管轄 歡迎流亡海外人士申請庇護 --

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