作者annesamuel (as)
看板Biotech
標題[求救] PCR的問題
時間Tue Jan 22 18:20:46 2008
請問PCR product跑電泳出現smear且主要產物的band很弱
該如何解決??要稀釋template嗎???還是提高anneal溫度???
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.117.91.184
1F：→ sGoat:touchdown PCR 01/22 18:27
2F：推 sinwam:附個圖根條件大家比較好給意見吧!! 01/22 20:06
3F：→ annesamuel:不好意思我還不會張貼圖正在請教別人 01/23 20:04
4F：→ annesamuel:PCR反應條件： 01/23 20:07
5F：→ annesamuel:94℃ 2 min 01/23 20:07
6F：→ annesamuel:35cycle(94℃ 1 min, 55℃ 1 min, 72℃ 2 min) 01/23 20:12
7F：→ annesamuel:72℃ 7 min 01/23 20:16
8F：推 sinwam:你的band大小!跟膠的濃度跑的時間跟速度??資料詳細點! 01/23 21:20
9F：→ sinwam:會比較容易讓人知道你的問題可能會出在哪!! 01/23 21:21
11F：→ annesamuel:我的PCRproduct約0.5Kb,lane 1:marker,2,4,6:sample 01/25 13:54
12F：推 sGoat:請問一下template濃度以及抽取材料及方式(kit或是protocal) 01/25 16:11
13F：→ annesamuel:我的sample是珊瑚相伴細菌抽chromosome都抽到珊瑚的DNA 01/26 03:55
14F：→ annesamuel:細菌的DNA非常少不夠定量即時nest PCR,product也非常少 01/26 03:57
15F：→ annesamuel:用kit抽不到DNA,是用傳統方法抽chrosomal DNA 01/26 04:00
16F：推 sGoat:能夠增加你取的sample量嗎?如果你sample遠低於25ng/20ul的話 01/28 16:46
17F：→ sGoat:不管是進行多cycle或是多次nest好像都不能避免這種情形? 01/28 16:49