作者canongirl (變 世上唯一不變)
看板Biotech
標題[求救] Cloning 的問題
時間Sat Jan 19 21:22:14 2008
大家好，目前我手上有一個clone 要做
老師請我先去合兩條primers 有53mer
序列(舉例)： primer1：5'ATCGCGTGATATGTGCTCATAGCT...3'
primer2：5'TAGCGCACTATACACGAGTATCGA...3'
也就是兩條完全pair，因為這53mer其中包含我要clone的insert 另外有兩端各有BamHI
的切位可以接在vector上
但因為這兩條是ssDNA primer 老師叫把兩條primer混合在一起 然後heating
然後回到annealing 的溫度，然後他們就會接在一起了@@
真的會接在一起嗎？沒有polymerase的幫助也可以黏在一起？
有人有過做這樣cloning的經驗嗎 ？
天阿 救救我><
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◆ From: 219.84.233.122
1F：推 sGoat:有看沒有懂@@... 01/19 21:43
2F：→ canongirl:意思就是兩條primer不用polymerase就可以自己黏起來嗎？ 01/19 21:50
3F：推 bider:是要做RNAi嗎? pol是用來複製 DNA溫度下降就可以成雙股 01/19 21:51
4F：推 cutebetty:這樣做沒錯 也可以加polymerase在尾端加A進行TA clone 01/19 21:55
5F：→ cutebetty:直接用BamH1切可能會不好切 建議先送TA再切下來 01/19 21:57