作者untilnow (雨 不停落下來)
看板Biotech
標題Re: [求救]Protein從SDS-PAGEtransfer至PVDF的問題
時間Mon Jan 14 13:26:46 2008
※ 引述《willieh (willie)》之銘言：
: ※ 引述《willieh (willie)》之銘言：
: : 請問各位，
: : 我在做SDS-PAGE transfer至PVDF時，
: : 發現我的Pre-stained marker變得很淡，
: : 因此想請教各位，
: : protein有可能transfer過頭而離開PVDF嗎？
: : 還是變淡是因為染劑脫離protein而已？
: 嗯嗯，我想我說一下我的情況好了，
: 我是用濕式transfer，8x6 cm的PVDF，400 mA，60 mins
: buffer含25mM Tris, 192mM glycine, 0.1% SDS, 15% methanol。
: 因為pre-stained marker在PAGE上非常清楚，
: 但是在transfer後幾乎沒有了，
: PVDF上淡的可憐....
: 因此想到幾個問題：
: 會不會是transfer過頭了？
: 但是在PVDF上的protein會容易過頭嗎？還是只是染劑跟protein脫離？
: 當然推文的sGoat您說gel跟membrane非密合這點我也蠻同意....
: 還有其他可能或建議嗎？
也有可能是你的PROTEIN沒過去， 可以試著TRANSFER久點
或是TRANSFER完後，把剩下的GEL拿去做coomassie blue 染色看看
確定你的PROTEIN有完全到MEMBRANE上
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「如果連正義會獲得最後勝利這種事情都不能相信，
那我們根本就不知道該相信什麼而活下去了……」
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