作者willieh (willie)
看板Biotech
標題Re: [求救]Protein從SDS-PAGEtransfer至PVDF的問題
時間Sat Jan 12 21:25:40 2008
※ 引述《willieh (willie)》之銘言：
: 請問各位，
: 我在做SDS-PAGE transfer至PVDF時，
: 發現我的Pre-stained marker變得很淡，
: 因此想請教各位，
: protein有可能transfer過頭而離開PVDF嗎？
: 還是變淡是因為染劑脫離protein而已？
嗯嗯，我想我說一下我的情況好了，
我是用濕式transfer，8x6 cm的PVDF，400 mA，60 mins
buffer含25mM Tris, 192mM glycine, 0.1% SDS, 15% methanol。
因為pre-stained marker在PAGE上非常清楚，
但是在transfer後幾乎沒有了，
PVDF上淡的可憐....
因此想到幾個問題：
會不會是transfer過頭了？
但是在PVDF上的protein會容易過頭嗎？還是只是染劑跟protein脫離？
當然推文的sGoat您說gel跟membrane非密合這點我也蠻同意....
還有其他可能或建議嗎？
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◆ From: 140.116.253.121
※ 編輯: willieh 來自: 140.116.253.121 (01/12 21:26)
1F：推 tsubasawolfy:60min還好吧 我都一個半小時... 01/12 21:31
2F：推 borhen:我是定電流~~= =400mA 4hr or 40mA overnight 01/12 22:16
3F：推 malakaki:60分...有點少耶~ 我跑400mA 150min~175min 01/12 22:17
4F：推 bluecsky:你這樣應該沒過頭..我猜是染劑被洗掉了.. 01/12 22:30
5F：→ tsubasawolfy:換一牌不然就加amrker量- -? 01/12 22:32
※ 編輯: willieh 來自: 125.229.44.153 (01/13 00:14)
6F：→ willieh:寫錯了，是400 mA.... 01/13 00:14
7F：推 jbking:400mA 一小時半到兩小時效果不錯 01/13 03:31
8F：推 chvkimo:PAGE上的marker都已經過去了? 01/13 12:29
9F：→ willieh:嗯，marker都過去了。 01/13 15:25
10F：推 spermegg:加marker的量應該會有幫助 01/13 18:59
11F：推 t123401221:如果PAGE上的Maker都有過去.那你要看Band應該有過去啦 01/13 20:58
12F：→ willieh:只是transfer過去的pre-stained marker顏色都淡掉了 01/14 20:45
13F：→ willieh:不清楚是顏色淡掉還是protein跑掉 01/14 20:46