最近實驗室要做免疫組織染色IHC 我所要染的組織是大鼠的大腦，這次要染的是MPO, nfkb 做冷凍切片後用oct包埋~ 我照著實驗室之前學長姊所留下來的protocol做 但是一直染不好，有時候會出來有時候不會。 最近更慘，呈色時一點顏色也沒有。 請各位大大幫我看一下我的步驟有沒有問題 我的染色步驟 1.先用paraformaldehyde固定 5min 2.用pbs wash 3.冰醋酸 5min 4.pbs wash 5.3% H2O2 30min 6.PBS wash 7.serum blocking 30min 8.PBS wash 9.primary anti-body 4度C overnight 10.PBS wash 11.secondary anti-body 1hr 12.PBS wash 13.ABC kit 接著以nickel+DAB 呈色 大至上來說~步驟我是覺得沒有什麼問題~因為學長姊染的出來 不過隨著學長姊的畢業~這些東西也跟著走了~ 在呈色後，檢體上沒有顏色讓我很慌 一開始是覺得我的細胞打洞沒有打好 所以我試著延長冰醋酸的時間(沒有稀釋)或使用tritonX-100 沒有效，接下來我增加的是一抗的濃度、時間都還是沒有效 我覺得有可能是因為那隻一抗有問題，所以使用一隻NeuN同時進行染色 (染神經細胞來確定我的染色有沒有問題) 染出來之前neun的效果還不錯，但是現在連neun都不是很明顯 二抗的物種我可以確定我沒有用錯，我現在不知道還有什麼方法可以試 怎麼讓我的染色品質更穩定，整片沒有顏色我是該說我洗的太乾淨了嗎? 試了很久都沒有什麼起色... 請問我現在還有什麼方法去看我哪裡出問題?或是各位有什麼建議~感謝~ --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.141.37