作者maoneko (mao)
看板Biotech
標題[求救] DNA isolation by Trizol
時間Wed Jan 9 14:24:56 2008
我最近開始用trizol抽DNA ，
之前完全沒有試過，
按照別人給的protocol操作,
結果最後測OD時有一管為0，沒有DNA
一管為0.9mg/ml,但260/280=0.3, DNA濃度很低且不夠pure
請各位有經驗的人幫我看一下是出了啥問題？
~~謝謝大家~~
我的protocol如下
1. cell pellet + Trizol 1 ml, vortex
2. 55度C, 10 mins
3. add 200 ul Chloroform, vortex
4. 靜置5 mins
5. spin 1200 rpm, 15 mins, 4度C
6. 移除上清液, 取出中間層白色部份DNA
7. add 300 ul 100% ethanol, vortex, 靜置3 mins
8. spin 12000 rpm, 5 mins, 4度C
9. add 1 ml 0.1M Sodium Citrate in 10% ethanol
室溫上下翻轉30 mins
10. spin 8000 rpm, 10 mins, 4度C
11. 移除上清液，重複9.10步驟
12. add 1 ml 75% ethanol,室溫上下翻轉10 mins
13. spin 8000 rpm, 10 mins, 4度C, 移除上清液
14. air dry 5 mins
15. add 50 ul TE buffer, 65度C 30 mins,
加熱過程中vortex數次
16. 測OD
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.134.146
1F：推 linlin711006:你確定是中間層嗎 ? @@ 01/09 14:51
2F：推 grandia:我記得是中間層沒錯 這部份可以繼續分出DNA and protein 01/09 15:23
3F：推 wea:照他的protocol看來 不需把中間層取出 直接加100%酒精即可 01/09 16:02
4F：推 sGoat:你第6步有問題應該不是中間層,而是轉置上清液吧... 01/09 16:08
5F：推 sGoat:還有chloroform離心完,中間那一層是蛋白跟細胞碎片... 01/09 16:14
6F：→ sGoat:建議去找一下官方protocal... 01/09 16:16
7F：推 b1ackie:第六步我覺得是取出上清液，網路上再check一下吧 01/09 16:18
8F：推 wea:第六步上清液是分RNA用 剩下的有機層可分DNA及Protein 01/09 16:29
9F：→ wea:之後加EtOH 沉澱物是DNA 上清再加isopropanol 沉澱得到蛋白 01/09 16:30
11F：推 naturer:DNA還是用別的方法抽比較好 01/09 22:30
12F：推 nixo:如果你沒有同時要RNA，用其他方法會比用Trizol好吧。 01/10 00:02