※ 引述《doskoi (doskoi)》之銘言： : 最近要做apoptosis : 老闆想看DNA fragmentation : 可是卻做不出來 : 先說說我的作法 : 為了先試試技術可不可行 : 我利用3mM的H2O2去treat SKBR3 cell : 6個小時後收cell抽DNA : 跑2% agarose gel : 卻只能看到well下方一大團DNA,沒辦法看到ladder : 是我treatment的方法有問題嗎? : 還是抽DNA出問題? 我詳述一下我抽DNA的方法 大家看看有沒有問題 1.收cell後加入lysis buffer (10mM EDTA, 50mM Tris-HCl, 0.5% sarkosyl, ph=8) 2.lyse後加入proteinase K (final 1mg/ml),56度3hr 3.加入RNAse A (final 1mg/ml),56度1hr 4.之後加入兩倍體積的phenol/chloroform/IAA(25:24:1),混合後靜置30分鐘 5.在4度c以12000g離心15分鐘 6.取上清液加入3倍體積的無水酒精和1/10的sodium acetate,靜置-20度30分鐘 7.以12000g離心15分鐘,移除上清液後用75%酒精wash pellet 8.再一次12000g離心15分鐘,移除上清液後將pellet乾燥 9.再以TE buffer如解pellet後就測濃度跑膠了 這算是傳統方法了吧 這樣抽不到嗎? 我看paper方法都很類似 還有更好的方法嗎? kit除外,因為沒錢ORZ --

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