※ 引述《sinwam (sinwam)》之銘言： : 昨天幫你問了一下別人,他的答覆是不行!! : 他說:很少人抗體是anti-rat IgG2a or 2b,因為意義不大, : 而且不可能在同一片western上分別rat IgG2a and 2b, : 他建議你換rabbit & rat 的一抗,才有可能在同一片western上看到, : 不然就用同一個二抗 可是要在不同的western片子上看, : 一般2抗只有anti rat IgG(H+L) or IgG Fc or IgG F(ab')2 or IgG+IgM (H+L) or IgM : mu chain specific : 這是他昨天給我的答覆內容!!你參考看看吧!! 我想 真的是有二抗是 IgG2a or IgG2b (因為本人有用過 大家不要學.....) 以前的二抗分門別類的很細 (因為這是老闆在她博士班留下來的...所以有大於10年以上) 現在可以選用 IgG 的來接合 2a or 2b 另外 介紹一家 我最愛的二抗 Jackson 啥都有 效果好 保存好可以放N年 http://www.jacksonimmuno.com/home.asp 其實 Western blot 也是變相的 IHC (都是抗原跟抗體....) 做雙重染色(兩種抗體)或是三種以上 都是可能的 只是要怎樣去把非專一性結合去除 前一段時間 我把位置在 45 跟 55 的兩種蛋白 同一張membrane上 同時染 兩個不一樣的抗體 (都是Rabbit anti-rat) 不過一開始 我是分別做 跟我後來趕時間 兩個加加一起 出來的結果一樣 這可能是我要慶幸的囉~~ (不過 我有先確定過 再加在一起反應看看) 反過來說 如果剛好這兩個一抗一個是IgG2a and IgG2b 那我就可以用兩種二抗囉 @.@ --------- 以上是我肚子餓亂說 試試看囉 : ※ 引述《piparing (批哩啪啦)》之銘言： : : 最近要使用兩支Monoclonal antibody來做Western blotting : : 一支的Ig class是rat IgG2a : : 一支是Ig class是rat IgG2b : : 所以二抗理當要用goat(or other species) anti-rat IgG2a : : 以及goat(or other species) anti-rat IgG2b : : 但是這種針對IgG2a以及IgG2b的抗體很少且非常昂貴 : : 不知道我可不可只使用goat(or other species) anti-rat IgG這隻抗體 : : 來分別偵測rat IgG2a以及rat IgG2b : : 這樣可以成功嗎? : : 或是有人能建議使用anti-rat IgG Fab or anti-rat IgG Fc ? : : 希望有經驗且知道的版友能夠分享經驗 :) : : 也希望能提供可以做出來的antibody廠商 : : 非常感謝! --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.15.163.64