作者RaelLai (哇哈哈)
看板Biotech
標題請問萃取膜蛋白用的方法
時間Mon Dec 24 18:39:49 2007
有爬過文了,很多都是用超高速離心或是直接買kit
但是我想問的是,如果想要看protein translocation的話
是不是需要先把細胞打孔?(這樣後續離心才可以分出nucleus cytosol and membrane)
然後再用RIPA buffer把各個fraction lysis掉
於是我有找paper
有人是用polytron homogeniser(這什麼?我查叫均質機)做預處理然後去做超高速離心
但是實驗室並沒有那樣的設備,請問我可以用sunication的方式去把細胞膜打孔嗎?
我嘗試做過然後去染發現trypan是可以讓dye跑到細胞裡面
但是sonic的強度時間不好抓,我怕到時purified出來根本就不純
所以不知道用什麼方法比較好??
另外sucrose gradient查網站都沒有很明確的一個protocol
雖然有人說不好做但是我到是想嘗試看看
不知道有沒有不錯的教學網站呢??(我們實驗室目前沒人做這方面)
在此先向各位說聲謝謝^^
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◆ From: 203.64.49.5
1F：推 bluecsky:你是說用sonication替代均質機嗎? 12/24 19:36
2F：→ bluecsky:很遺憾..我覺得是不行..均質機其實打的沒有很大力歐歐 12/24 19:37
3F：→ bluecsky:他就是拿2ml的eppendorff裝入小鋼球去機器中震動 12/24 19:37
4F：→ bluecsky:與其說震動其實也只是讓小鋼球在管中碰撞把sample打爛 12/24 19:38
5F：→ bluecsky:所以要取代的話...不如你自己去磨反而應該差不多才對.. 12/24 19:38
6F：→ bluecsky:我説的是我看過的均質機啦..應該有各種不同的 12/24 19:40
7F：→ bluecsky:不過我想他打的力道都沒有sonicator這麼強吧.. 12/24 19:40
8F：推 terp:我記得有人有用針筒打 約26號針筒 來回抽吸破細胞 12/25 00:35
9F：推 zoom8080:反覆冷凍解凍也可以打破~~ 12/25 01:48