作者gwendiline (丹丹)
看板Biotech
標題[求救] 藍白篩 全都白><
時間Tue Dec 18 21:27:24 2007
先前有問過X-gal的問題
我的老師還是很堅持要我用DMSO
因為DMF 如大家所知
是管制藥品
用多少 得紀錄多少...
雖然我有上教育訓練 可以操作
但 我的老師 還是希望 能用DMSO就用DMSO...><
問題來了..
我已經畫了超過50個plate..
每個plate 都長菌
可是全都是白的..(￣__￣；)
X-gal是粉劑 新的
DMSO 有些時日..(從我大學進這實驗室就有了 至少四年)
一切操作 都避光
有用錫箔包 操作台也沒開日光燈...
因為T/A clony是用Kit
vector ligase等藥劑都是算好的量
也因此 我PCR:vector 並沒有估量
(沒有跑電泳做濃度check)
想請問大家
到現在 全部都是白的><..可能會是什麼問題?
真的很白喔!!
不是淺藍....
希望有經驗的人 能給予點意見
感激不盡!!
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◆ From: 140.120.192.30
1F：推 bluecsky:白不是好事嗎?..還是連應該藍的control都是白的? 12/18 21:38
2F：→ gwendiline:我沒做control>< 因為competent cell 只要一溶解 100 12/18 22:08
3F：→ gwendiline:micro全要做完 我覺得很浪費..我也知道這是不對的 12/18 22:09
4F：→ gwendiline:還是有更好的方法嗎?>< 我是買益生的competent cell 12/18 22:10
5F：推 blence:請把100ul多分幾管做就好了，反正用不著全部塗plate 12/18 22:13
6F：→ blence:我們一管115ul左右，每次分用10~20ul就用的嚇嚇叫了 12/18 22:17
7F：→ gwendiline:樓上 請問一下唷~ 溶解後分裝 可以不失效果嗎?? 12/18 22:23
8F：推 cometrise:順便請問一個問題,competent cell要跟哪一家買 12/18 22:24
9F：→ cometrise:比較好呢?請大家推薦一下,Heat shock用的,謝謝 12/18 22:24
10F：推 yucmbuu:如果是益生的competent cell理論上可以回溶好幾次不會影響 12/18 22:28
11F：推 borhen:competent cell不是可以自己做 12/18 22:32
12F：→ yucmbuu:效率, 沒忘了加IPTG吧?X-gal與IPTG濃度有沒有算錯?可以將 12/18 22:32
13F：→ yucmbuu:plate放在4C冰箱,beta-glactosidase會繼續反應,顏色會變深 12/18 22:35
14F：→ yucmbuu:但是colony不會變大.理論上不太可能都是白色菌落,之前曾發 12/18 22:36
15F：→ yucmbuu:生益生的competent cell本身就具有抗藥性,可以測試一下. 12/18 22:38
16F：推 bluecsky:IPTG X-gal都有加而且濃度沒錯的話 12/18 23:43
17F：→ bluecsky:收plate後先放4度約一個小時..表現就應該很明顯了 12/18 23:43
18F：→ bluecsky:你應該做一些control看是不是真的跑不出藍色 12/18 23:44
19F：→ bluecsky:還有這種comercial的competent cell可以分裝的 12/18 23:44
20F：→ bluecsky:我得確有幾次做的結果是完全沒藍色..運氣好吧 12/18 23:45
21F：→ bluecsky:但是colony也不多就是了 12/18 23:45
22F：→ gwendiline:IPTG等藥劑 濃度都沒錯 放過4度了 仍然是白色..@@ 12/18 23:56
23F：→ gwendiline:另外感謝各位的經驗~也謝謝Y大告訴我益生可回溶的資訊 12/19 00:00
24F：推 oyjn:你白色菌落後來有抽出plasmid嗎? 12/19 18:53