作者NightAmades (夜)
看板Biotech
標題[求救] SDS PAGE gradient gel 製備
時間Mon Dec 17 10:47:17 2007
在下需求是希望將2D的第二維分的更開
好讓我想觀察的蛋白質spot可以更明顯!
所以想請問有自製蛋白質梯度電泳膠經驗的大大!
我使用製作DGGE的裝置去做梯度膠!
可是有兩種狀況~
一：
用針頭加針頭，由中間緩慢load膠，
但是凝固後在外觀上(隔玻璃看)
會有一圈一圈疑似"不連續面"的現象~
因為看到這情況就不敢直接用在sample上!
於是長是第二種做法如下：
二：
不加針筒直接load膠，由邊緣緩慢注入。
結果發現第一種情況確實得到改善許多
(但是邊邊還是多少會有第一種情況一圈一圈的)
於是就用這樣的膠片去跑第二維!
可是跑出來的結果顯示出我整片膠的pattern會有"波浪狀"(水平式)的現象!
同時跑兩片膠，兩片不同sample都如此呈現!
所以在此想請問大大是哪方面出問題或是需要改進!?
以及各位大大在自製gradient gel 有無其他更好的做法!
結果是漂亮的!感激不盡!
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◆ From: 210.243.40.249
1F：→ NightAmades:打錯 是針筒加針頭 = = 抱歉 12/17 10:47
2F：推 machin:有圖嗎?我猜可能是loading的sample濃度或體積不同所導致的, 12/19 10:31
3F：→ machin:所以我都會用PBS或是sample buffer補到一樣的體積^^ 12/19 10:31