※ 引述《[email protected] (olliestrong)》之銘言： > ※ 引述《rick0622 (olliestrong)》之銘言： > : 請問一下 blocking的意思是什麼阿??一直找不到 > 不好意思 我好像沒說的很詳細 我是想問說SDS-PAGE這個實驗裡的 > blocking 步驟是什麼意思?? SDS-PAGE 這個實驗技術裡面不會用到 blocking 我猜你說的是 western blot 這跟 SDS PAGE 雖然經常是連在一起用的技術 但實際上是兩件事 而要了解 WB 的 blocking, 要先回想一下 WB 的原理 你有興趣的蛋白質先 bind 到了 membrane 上的某個位置 然後用 primary Ab 去辨認它 然後用 2nd Ab 去辨認 primary Ab 然後再去偵測 2nd Ab 的特性（酵素活性或是螢光） 現在問題來了 既然你有興趣的蛋白質可以 bind 到 membrane 上 那你憑什麼認為 你的 primary Ab 只會 bind target protein 而不會也 bind 到 membrane 上？ 同樣的，又憑什麼認為 你的 2nd Ab 只會 bind primary Ab 而不會也 bind 到 membrane 上？ blocking 就是為了解決這樣的疑慮 因此在加入抗體以前 先把 （應該）已經 bind 上你有興趣的蛋白質的 membrane 泡到一些亂七八糟的蛋白質裡面 例如牛奶, albumin, normal serum 都有人用 這樣一來 就算你的 membrane 會無專一性地去亂 bind 蛋白質 在 blocking 之後 這張 membrane 上也已經沾滿了亂吸八遭的蛋白質 而不會再去 bind 你的抗體了 --- 不過在時作上 有些 membrane 在 transfer 以後就不會再 bind more protein 了 因此 blocking 可以略過而不會影響結果太多 -- PTT 的推文站外看不到 本文來自生科站（telnet://140.114.98.20） 故 勿推此文 另提供即時通生物科技相關諮詢服務，每小時十五美金，請支付予聯合勸募，意者來信 -- ※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> ◆ From: cpe-66-61-25-6.neo.res.rr.com