※ 引述《[email protected] (成長)》之銘言： > 我有一個clone 是接在puc18上 > 所以要抽取此plasmid 就要大量的養菌 > 但是養菌只能一管一管的養 > 也就是說 如果我要很大量的此clone > 我就要養很多管的菌 > 請問有什麼方法可以更快速且更大量的使菌生長抽plasmid > 我有想過把養菌的LBA量加倍 > 但是長出來的菌沒有變多 > 是因為時間不夠久嗎??(overnight) > 還是因為細菌生長曲線的限制呢??? > 謝謝!!!!!!!!!!!! 我很想丟一個 RTFM （Read the FUCKING manual) 了事啦... 不過人老了也變得比較溫良恭儉讓 還是來回答一下好勒 首先，還是誠心而無限嬌羞的說聲 RTFM 拿一本 Qiagen 的 Mini Midi Maxi Mega 的四神合體手冊來仔細研讀 沒有的話自己去 Qiagen 的網站上 download 我說仔細研讀喔 不要手冊一拿來就翻到 Maxi 那一頁準備開始作 前面教你怎麼因應 plasmid, 菌種, culture media 的部分才是重點 還有前面發問的頭兩句話邏輯就不通 "你的clone 接在 puk18 上面" 這絕對不是 "抽 plasmid 就要大量養菌" 的理由 決定你是否要大量養菌的因素是 1. 你要多少 plasmid? -->這個問題要問施主您自己 2. 你的 plasmid 的 copy number 是多少？ -->puc18 很高了，所以這點應該不是問題 3. 你用的什麼菌種？ -->E.coli. 百百種，你的是哪種 strain? 這種菌種生長速度如何？是否含有 endonuclease? 4. 你用的什麼 culture media? -->LB 各家的配方可能有一些差異 另外還有所謂的 rich media 要考慮的就更多了 5. 你抽 plasmid 的效率好不好？ -->不是說抽不到 tip 的 full capacity 就只要增加菌量就好 如果是你抽 plasmid 技術的問題，增加菌量不會有幫助 --- 根據 Qiagen 的手冊 抽一個 high copy number （例如 puc18）的 Maxi 的養菌流程如下： 1. 先養一個 2-5 ml 的小 starter culture 養八小時 （個人建議早上一到實驗室就可以開始養） 2. 拿一個 500 ml 以上的錐形瓶 放 100 ml LB, 加入 100 - 200 ul starter culture 養十二到十六小時 （這一步可以傍晚回家前作，第二天早上來剛好十六小時 哦對了如果你沒有用錐形瓶養過菌，記得瓶口要用鋁箔之類的東西輕輕蓋上） 3. 把菌離心下來。總菌量，濕重大約 "零點三克" 就夠，多則無益。 -- PTT 的推文站外看不到 本文來自生科站（telnet://140.114.98.20） 故 勿推此文 另提供即時通生物科技相關諮詢服務，每小時十五美金，請支付予聯合勸募 -- ※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> ◆ From: boblu.STUDENT.CWRU.Edu