作者Nikio (工作有夠忙)
看板Biotech
標題[求救] FLAG抗體
時間Tue Dec 4 08:41:42 2007
我在做FLAG-tag的蛋白質實驗
實驗大致如下
實驗組：有個PROTEIN帶FLAG, whole cell lysate
control組：一樣的細胞，不過沒有PROTEIN帶FLAG
先用FLAG affinity beads做IP
wash過7遍後拿BEADS去煮
之後做western
用的抗體是Sigma M2 monoclone antibody
很鳥
染出來一堆bands
連negative control也一堆(有用affinity column先抓耶@@)
有在GOOGLE查到國外論壇也很多人碰到相同問題
http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/13665.html
有人碰到類似問題嗎？要怎麼解決？感恩 ><
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.126.12.63
1F：推 blence:sigma M2的Ig濃度太高,不小心使用很容易就會這樣 12/04 13:11
2F：推 leoblack:你的flag beads上面的Ab是不是也是mouse的?! 12/04 14:52
3F：→ leoblack:不曉得你的一堆band是不是heavy/light chain~ 12/04 14:53
4F：推 Nikio:flag beads上也是M2 abs, 老鼠的，我SAMPLE是人的細胞 12/04 23:20
5F：→ Nikio:heavy/light chain會有一堆嗎@@ 不是只有兩條喔 ><? 12/04 23:21
6F：推 konlon:請於煮sample時於sample中加入1-1.5ul之1M DTT 可改善 12/05 21:46
7F：→ konlon:因為IP及WB 1抗 同一Species之Ab所造成之heavy/light chain 12/05 21:47
8F：→ konlon:可以試試看 很好用 但若要看的蛋白不能是25 or 50kD 12/05 21:49
9F：→ Nikio:我實驗不能用DTT耶(Orz) 12/10 22:05