※ 引述《ROKEE ( Beanazai)》之銘言： : ※ 引述《xmanxpower (188)》之銘言： : : 我是利用pPICZalphaC為載體以及SMD1168H為宿主 : : 我要表現蛋白酶 : : 問題一、 : : 我想問回溶到OD600=1是怎麼做的？？這一步驟 因為要換成不同碳源的 medium 從 glycerol 換成甲醇 沒洗乾淨的話對蛋白質表現的影響有多大就不得而知了 不過因為覺得每次測 OD 很麻煩 而且不停的調整濃度再取sample 測 OD 會增加汙染的可能性 所以我的做法是改成測濕重 一開始先試好大約多少比例回溶的 OD 等於 1 之後就都秤濕重然後依比例回溶 準確度頗高 而且老實說 這個地方的OD也只是一個大概 反正最終目標是取得大量表現的蛋白質 加入甲醇量對蛋白質表現量的影響還比較大 如果情況允許的話 12小時加一次的效果會比較好 或者應該說 通常 24小時加 1% 效果可能不如 12 小時加 0.5% 因為甲醇濃度太高對 pichia 本身也不太好 不過沒表現的話就是沒表現 不會因為改一大堆生長條件就變成有表現 這是浪費半年得到的結論......... --

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