大家好 我目前正在做Pichia 表現系統 我是使用外泌性蛋白的菌株 不過很奇怪的事 我第一次做我要表現的基因這個實驗時(小量培養) 用western 都可以偵測到我要的產物 可是第二次做的時候 也是小量培養 訊號就變弱了 等到第三次做的時候 就完全沒有訊號 應該事沒有表現蛋白 第四次做也是依樣的結果 我每次做western都會把第一次實驗有出現訊號的sample加入 當作positive control 每次都有訊號 我以為是我用的菌株所攜帶的質體發生什麼事情了 於是我再把這隻菌塗在MD medium上測試 結果是OK的 會長 代表質體沒有掉 可是不知道為什麼 只有第一次 第二次做的出來 對了 在做第二次的時候有換過新的甲醇 此外其他的操作過程都沒有改變 我猜想可能是 induction出問題 可是我用其他的此基因的轉型株 也是沒有訊號 不知道各位高手有沒有好的意見 謝謝 -- 三歲的時候你就偷看別人洗澡,四歲的時候你就逼人偷看你洗澡..... 七十歲的時候你這個老不休才想到要去割包皮, 七十一歲的時候你騙小女孩說要去看金魚其實是想要非禮人家, 七十二歲的時候跑去做大玻璃看有誰光顧你就給他一塊兩毛五外加一個包子.. 你罵夠了沒? 還沒!我想到剛剛罵你四十歲罵得還不夠賤.真氣人... --

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