作者ayinie (福小花是我家熊貓)
看板Biotech
標題Re: [求救] SDS-PAGE跑出來非常醜
時間Sun Nov 25 18:39:18 2007
圖片來了
http://www.pixnet.net/album/paramyxo/13260373
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1F：推 Chelsea911:有圖嗎?這樣講很難判斷~太多可能的因素了! 11/23 22:46
2F：→ Chelsea911:不過這樣子看應該還是製膠的問題... 11/23 22:47
3F：推 sisyphus:覺得是buf的問題 11/23 23:38
4F：推 zoom8080:well先用running buffer沖乾淨再loading試看看... 11/24 00:02
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請問這是什麼意思?
5F：推 Ren:running buffer是「新配」的嗎？還是有用過？如果有用過，換. 11/24 00:23
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我們實驗室的running buffer是一大瓶stock
平常要使用的時候再自行稀釋
用完就倒掉不回收
所以...這樣算新的吧?!
6F：推 greenmoon00:把"殘骸"還送上來讓大家評鑑評鑑...XD 有染色的更好 11/24 00:34
7F：推 JanChang:有氣泡所以跑的時候撞上了？ 11/24 11:33
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請問這是什麼意思?
另外我看了一位板友的回文所附的網址
我覺得我的比較像這個
http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/studies/sds-page/gelgoofs/bizarre.html#2
sample 2
它上面的說明是電流太大以及過熱
可是我以往用同樣的條件去跑(120V/90min)就沒有這情形
這次改用150V/20min;100V/90min的兩段式跑法也是一樣歪七扭八
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.209.190.2
※ 編輯: ayinie 來自: 210.209.190.2 (11/25 18:39)
8F：推 blence:如果你覺得是換buffer之後開始的,是否你有搞錯濃度,看錯配 11/25 18:46
9F：→ blence:方,或者像Tris base拿到Tris-HCl等,因為問題是這時候發生的 11/25 18:47
10F：→ blence:至於電壓,160V/70min是我常用的條件,是也沒有這種狀況 11/25 18:49
11F：推 ayinie:Tris的問題可以排除 搞錯濃度也沒有 配方也沒看錯 11/25 19:05
12F：推 hkaiwei:你sample的buffer是什麼? 確定可以跑 SDS-PAGE嗎? 11/25 19:40
13F：推 Chelsea911:Tris-base跟Tris-HCl只差別在pH值而已,其實都是Tris=-= 11/25 21:27
14F：→ Chelsea911:要注意的是配出來的BUFFER的pH是否正確,濃度是否正確 11/25 21:28
15F：推 nixo:跑之前用running buffer沖洗一下well內，可以用針筒或pipette 11/25 21:41
16F：→ nixo:因為gel凝固後會有些水份被擠出來，讓well內有些雜質。 11/25 21:43
17F：推 liuse:不過你的marker很正常阿 11/25 22:59
18F：推 Chelsea911:PS:不是懷疑電壓過高嗎?怎你又用更高的電壓=-= 11/25 23:28
19F：推 angelhunter:sample buffer 11/26 00:24
20F：推 pent:SDS濃度錯誤?因為前陣子實驗室才發生過類似的情形 11/26 01:26
21F：→ pent:那次是因為SDS濃度只有正常的1/10,跑起來連marker都像海鷗 11/26 01:27