作者babyfinerain (心香水)
看板Biotech
標題[求救] 我的western><~~~~~~~~
時間Thu Nov 15 22:53:29 2007
小妹的western已經一個月了....
押出來全部都是空白片@@.....
後來受不了了><
這禮拜把啥都試了....
60 ug sanple
膜上有蛋白~所以transfer沒問題
以一抗 actin 為例 overnight 4度
二抗 anti-mouse IgG 1:5000 2~3小時
柏森的ECL 加了之後約15分鐘路程...壓片---> 空白
今天把ECL拿到暗房加
發現...是有band的....
加了ECL後...有很亮的band...但是過一下下就不見了
壓片時也只有弱到快不見的的痕跡
為啥會這樣呢????
這和我之前的條件都一樣..但是之前壓出來的片很漂亮
自從某次之後都在也壓不出來了...全都是很乾淨的空白片
參考板上說的...是不是2抗太濃??
但是之前作也是1:5000也很OK阿
請問各位先進~~~還有什麼原因呢???
之前用一樣的條件都是在實驗室加完ECL後去壓片
因為等電梯所以約30分鐘
但壓出來還是很漂亮阿
而且都還是用弘晉ECL
但是最近是怎麼都做不出來....
我已經到了疑心疑鬼的地步了><~~~
嗚~~~哪位好心人可以告訴我到底為什麼><~~~~~~~~~
上帝一定會非常保佑您的><~~~~~~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.164.13.203
1F：→ mournermind:我沒做過鴉片~但我同學她之前一直失敗的原因是因為顯 11/15 23:02
2F：→ mournermind:影劑壞了還是另一個甚麼劑壞了都變黑了~~加油! 11/15 23:03
3F：推 blence:用柏森的,1,2抗都各稀釋2~5倍以上,再lysate降低1倍,就好了 11/15 23:02
4F：→ blence:你應該是從SantaCruz換成millipore,才發生問題的？ 11/15 23:04
5F：推 nixo:有可能是太濃了，把ECL消耗光了。 11/16 00:45
6F：推 malakaki:太濃了~~你膜上是不是出現黃色的band 11/16 00:57
7F：推 meiosisLin:顯影劑用多久了？.............. 11/16 08:26
8F：推 babyfinerain:不是ㄟ～我用SantaCruz的ECL仍然是壓不出來 11/16 13:53
9F：→ babyfinerain:所以才換學姊用OK的伯森ECL試試看...可是還是壓不出ꠠ 11/16 13:53
10F：→ babyfinerain:請問是指什麼東西太濃嗎？？是一抗～還是二抗？？ 11/16 13:54
11F：推 t123401221:你二抗用1：3000試試看.HI兩個小時就好 11/16 19:41
12F：推 kakaman:ECL有需要那麼久嗎 不是幾分鐘就可以了 11/16 20:29
13F：推 konlon:我想你的protein amount過高 呈色劑呈色過久 11/21 18:41
14F：→ konlon:蛋白太多你才會看到類似燒焦的band 11/21 18:42