作者choyalove (我們說好了唷~)
看板Biotech
標題Re: [求救] 藥物顏色對 MTT 吸光值的影響
時間Mon Oct 29 00:23:23 2007
: 我有點好奇你們用的是什麼藥說
: 還有您的DATA呈現什麼樣的狀態阿
: 為何會讓您覺得OD值有受影響
: 我有點好奇，說不定我們也有類似的情況但是我們沒有發現
: 我們實驗室也有使用MTT偵測CPAE的增生
: 我們是先treat藥物(中藥)，將藥物移除後用PBS wash
: 細胞是endothelial cell，會wash 2~3次後加入MTT
: 在加入MTT之前，先將MTT(溶於PBS)稀釋成1/5，CPAE用MEM養，所以用MEN稀釋
: 加入MTT後incubate 4個小時，移除MTT反應液
: 加入DMSO
: 測OD
: 這樣的流程RUN了一年多都還滿順的
: 應該不會有問題吧^ ^||||||||||||||||||
我的樣品是一般食藥材 有食材或是中藥
我的目的不是要毒殺我的細胞
而是看我樣品能否提高細胞免於毒物的傷害
所以我一開始會先測試樣品對細胞是否具有毒性
也藉此選出適合的作用濃度
我會懷疑 DATA 有問題
除了數據做出來雖然說沒有毒性是很好
但是細胞存活率相對於 control 組飆到 200% 多
多少讓我覺得有點怪怪的... = =
另外就是我在用 SF-DMEM 稀釋樣品到所需的作用濃度時候
發現幾個本身顏色就很重的樣品
他們再最高濃度時候 會讓 medium 顏色變了
明顯跟其他不一樣
我本來也想移除樣品之後用 PBS wash 來避免他們顏色影響
可是細胞是 PC12 本身不是貼很緊的細胞
所以我怕我一洗 細胞會損失掉更多 誤差更大
我看之後考慮用 trypen blue 數算了...
雖然花的時間比較多 可是應該可以避免掉顏色這方面影響
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◆ From: 123.195.40.238
1F：推 blence:如果你的藥物會影響,那理論上應該有劑量隨著數值的相關性 10/29 00:35
2F：→ blence:而且就算拿別的細胞應該也會相似結果,如果要下這結論前可能 10/29 00:37
3F：→ blence:要先確認這些步驟,不然你的推論可能有缺陷存在 10/29 00:40
4F：→ blence:另外,如果擔心SF-DMEM變色,其實有phenol-red free的能使用 10/29 00:44
5F：推 Highwind:方法以達到目的最好.MTT快但沒友直接數精準,如果時間不 10/29 00:49
6F：→ Highwind:是問題的話,另外也要注意藥是否有氧化性,影響甚大 10/29 00:50