作者Nox4156 (人真好!)
看板Biotech
標題[求救]請問一下double digstion的問題! Orz
時間Wed Oct 24 19:12:42 2007
各位大家好! 我有一個Vector和Insert DNA 都要用 XbaI 和 EcoRI 處理
但是NEB的Buffer推薦的是buffer 2，然後切出來後竟然會形成很多bands的情形出現!
但是後來我改用 EcoRI 的專用buffer切後一樣會切出很多條bands。
第一次酵素加 0.7μl 最後體積 50 μl處理3hr，
第二次酵素加 0.3μl 最後體積 20 μl處理overnight。
請問條件會有差嗎? (但是結果都切的亂七八糟!)
但是我之前以 EcoRI 和 XhoI 處理同樣的基因和vector切都沒問題耶~
(用的是EcoRI 的專用buffer)
謝謝各位了!
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◆ From: 140.112.79.196
1F：推 HIbaby:應該沒有必要切那麼久吧 2hr就可以了 10/24 20:08
2F：推 HIbaby:如果你加的東西沒滅菌 可能會有影響 10/24 20:10
3F：推 jsi:可能是因為EcoRI作用太久產生star activity了 10/24 20:25
4F：推 wensing:問一下! 一般是切多久？ 若不會有亂切情況發生時。 10/25 00:41
5F：→ borhen:不建議EcoRI切太久 10/25 01:58
6F：推 jsi:可參考該酵素的使用說明書 應該都會有建議的作用溫度與時間 10/25 21:18
7F：→ jsi:我使用EcoRI通常不會作用超過一小時 37℃ 10/25 21:22
8F：→ jsi:如果同時使用兩種酵素切的效果不好 可考慮先切完一種酵素後 10/25 21:23
9F：→ jsi:再用另一種酵素切 10/25 21:24