作者yuiwei (誰要陪我吃麻辣狀員)
看板Biotech
標題[求救] PCR和 TEMPLATE 量多少有關嗎?..
時間Sat Oct 13 07:24:03 2007
看 說明書 是寫 50ul 要< 1ug
我要的是 20ul 取約 150-200ng TEMPLATE 跑 PCR
換過新的 酵素後 就一直沒跑出來...
用之前的酵素 可以有東西...
想一想 唯一影響的有可能就是 TEMPLATE 濃度
因為 ENZYME BUFFER DNTP 都是新的
難到是 PRIMER 有問題...??>
--
嗚呼！汝病吾不知時，汝歿吾不知日；生不能相養以共居，歿不得撫汝以盡哀；斂不憑其
棺，窆不臨其穴。吾行負神明，而使汝夭；不孝不慈，而不得與汝相養以生，相守以死。
一在天之涯，一在地之角，生而影不與吾形相依，死而魂不與吾夢相接。吾實為之，其又
何尤！彼蒼者天，曷其有極！自今已往，吾其無意於人世矣！當求數頃之田於伊潁之上，
以待餘年，教吾子與汝子，幸其成；長吾女與汝女，待其嫁，如此而已。
嗚呼！言有窮而情不可終，汝其知邪！其不知心也邪！嗚呼哀哉！尚饗。
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.217.247.132
1F：推 HIbaby:template是質體? 如果是質體 我通常只用 1到3ng去跑 10/13 08:54
2F：推 HIbaby:primer是 0.5到1mM 10/13 08:57
3F：推 allure1:template量不用給的這麼多 10/13 11:14
4F：推 allure1:我的template如果是質體 25ul放10-20 ng...也是放太多XD 10/13 11:16
5F：→ allure1:為什麼換了酵素出不來 會覺得是template濃度的問題? 10/13 11:18
6F：推 Highwind:換了酵素後,最大的問題絕對是溫度,慢慢try吧 10/13 13:15
7F：推 medbiotec:做個gradient試試 10/13 17:03
8F：推 sGoat:提供一下酵素由哪個換到哪個..可能是敏感度改變.cycle要放大 10/14 00:25
9F：→ sGoat:還有buffer跟酵素是一套一起來的嗎...混用會有很多問題... 10/14 00:29