我這兩個月在做insitu DQ-gelatin zymography的實驗，但是遇到種種的困難， 第一關於冷凍切片的厚度，通常一般冷切的厚度大概是20~40um這麼厚，但是根據paper 指出他們在切的時候是用10um，這是一個難度很高的事，因為基本上所取出來的腦組織 只用利用PBS灌流過，並沒有經過脫水和固定的步驟，因此在切片的時候組織非常容易 裂開或是破損，這個問題後來經過我的練習之後，仍然無法克服，但是後來我將切片的厚 度改為20um之後，就沒有這個問題了 第二就是關於DQ-gelatin的特性，基本上MMP會分解細胞外基質（也就是gelatin）所以這 個實驗就是將這個染劑（含有gelatin）用特定的buffer稀釋之後加在組織上面，放在37度之下overnight， 之後在螢光顯微鏡之下利用495nm波長的光線激發會發出綠色螢光，所以螢光的部份就是 MMP所在的位置，但是在paper的圖上即使沒有MMP表現的位置，也會有background的顏色， 可是我在做的時候並不明顯，所以不知道是什麼原因？ 第三個問題是，當gelatin被分解後，發出螢光的peptide會不會留在MMP所在的位置？ 因為在使用這個染劑的時候是在水溶液的狀況之下，所以不清楚被分解下來的peptide （就是會發螢光的部份）會不會留在原本的位置？還是會漂來漂去？ 拜託各位囉！！有經驗的人請幫幫忙吧！！ 感激不盡～～ --

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