作者newivan (.......................)
看板Biotech
標題Re: [問題]有 total cell lysate的濃縮法嗎?
時間Fri Mar 2 17:39:40 2007
※ 引述《[email protected] (六百)》之銘言：
: ※ 引述《[email protected] (逃避不是辦法阿)》之銘言：
: > 大家好
: > 最近在一直在作western,
: > 觀察的材料是total cell protein
: > 因為所使用的抗體很貴,所以都用小片的電泳膠
: > 但是因為想觀察的蛋白質需要用到較多的質量(ug)
: > 又因為sample數量多
: > 所以每次能夠load的體積有限,且分多次load跑出來的結果也比較容易不美麗
: > 除了在收蛋白質時,使用較少的lysis buffer
: > 有沒有方法可以濃縮已收下的蛋白質
: > 因為用少量的lysis buffer操作時對我而言較困難
: > 所以希望知道是否有事後濃縮蛋白質的方法
: > 先在此謝謝大家!
: 除了前面提過的透析, ultra filter 以外
: 冷凍乾燥也是一個方法
: 不過一片膠片能容納的總蛋白質也是有限的
: 超級高濃度的 lysate 很難跑得好
: 我倒是覺得可以用厚片的膠片（用厚的 spacer）
可以試試 TCA 沉澱 or Acetone 沉澱來濃縮
不過蛋白濃度太高會造成 gel smear
不然就多養幾盤細胞,一起粹取,增加濃度.
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.77.156
1F：推 threestars:不建議用TCA 之前我用過 PH值會改變太多 跑起來很醜 03/02 19:39