作者raining0924 (..N )
看板Biotech
標題[問題]有關real-time PCR 的結果?
時間Thu Mar 1 23:08:53 2007
最近在作 real-time PCR 的實驗
在RT-PCR時,有先跑膠,確定確實有產物(且只有一條band)
但在跑real-time PCR時, 卻發現melting curve 有兩個peak ..
我是用lightcycler 機器, 一開始以為是annealing Tm 不夠高..
但後來調至52度,仍有此現象....
且跑膠結果發現兩個peak的產物大小為(200bp and 400bp).
想請教板上各位大大...
這是什麼原因呢?? 是primer設計不好嗎?..還是??
最近實驗數據沒一個能交差的..請大家救救我吧...先謝過
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.146
1F：推 huangsw:如果有兩個產物 melting curve也不同 可以考慮非特異性 03/01 23:53
2F：推 raining0924:什麼的非特異性?不懂耶... 03/02 00:01
3F：推 huangsw:簡單的說 primer夾到non-target sequence 03/02 00:02
4F：→ aggaci:52度 蠻低的，我都用60度 03/02 00:16
5F：推 mandible:請換primer~~有primer dimer的情形! 03/02 10:14
6F：→ mandible:注意一下NTC的Tm值~跟產物是否相當?有的話可能dna conta! 03/02 10:15