作者pan7353 (要變成自己喜歡的模樣)
看板Biotech
標題[問題] colony PCR有band 但定序結果錯誤
時間Tue Feb 27 09:12:55 2007
我的 insert DNA 有 846bp(PCR 得到的)
放到 yT&A 的 TA cloning vector 中(用 TA clone 接)
藍白篩選了六個 colony 做 PCR 結果都有還算 specific 的片段
挑了四個 colony 送定序後 結果四個都沒有 insert DNA 的序列
甚至連 當初做 colony PCR 的 primer 序列都沒有
請問可能發生什麼情況?我是要重做一次嗎?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.79.56
1F：推 alaric:定序的primer用誰的? 02/27 12:26
2F：→ alaric:另外, 最好是送plamid去定序 02/27 12:27
3F：推 oooya:如果用vector的primer可能是正反接的問題把序列反轉試試看囉 02/27 15:08
4F：→ pan7353:定序的primer是vector上的M13,另外 我已經找過反轉互補 03/01 14:17
5F：→ pan7353:共四種可能性 但都沒有找到 03/01 14:17
6F：推 elgase:可能是你P到的東西本來就不是你想要的specific product 03/05 19:53
7F：→ elgase:我們家有遇過這種情況 03/05 19:53
8F：→ elgase:不如乾脆先直接把PCR product純化後送定序 03/05 19:54