※ 引述《bee (Bee)》之銘言： : 在此也順便請問一下板上高手們 : 什麼情況下會形成inclusion body? : 我在一本純化的書中看到culture size會影響 culture size 會影響的原因也很多 但是妳可以把你的培養條件設成最佳 那就可以排除他的問題 比方說 培養的體積跟錐瓶的比例 溶氧率的維持 shaker 的轉速 溫控 有的人刁的話連培養基的 autocleave 　時間也要控制 因為煮太久焦糖化作用把 glucose 　給破壞掉 那也會造成一些奇怪的現象 養大量養小量 不會有表現上的差別 差別是妳養大量或小量時 培養條件發生改變 比方說 妳用小瓶養大量 空間不夠 溶氧的比例較低 細菌長的不好 所以蛋白表現不出來 基本上 妳的問題其實沒有說清楚一點 妳在純化的時候那一批大量養的菌蛋白是否有表現出來 確認有表現了再去做純化 我之前有收小量 確認蛋白有表現並且是存於supernatant中 而這次收大量時 的確就沒注意到收大量和收小量culture condition間的差異 (沒想過溶氧率的問題) 感謝提醒 如果真的是inclusion body 　的問題 再來解決inclusion body 的問題 比如說降溫 改變IPTG 　濃度 或是換host 方法很多 等你確認問題 再說 我想主要還是culture的問題 感謝b大的提醒 過年後有把問題解決的話再跟大家分享經驗 謝謝 --

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