作者aswen ( )
看板Biotech
標題Re: [問題] 關於cloning
時間Sun Feb 11 17:37:54 2007
※ 引述《philesazumi (苦悶阿)》之銘言：
: ※ 引述《Adler (Adler)》之銘言：
: : 我想要將一段只有50初b.p.的tag
: : 接到一個約5kb的vector上
: : 想要請問一下 有沒有人做過類似的實驗
: : 可以告訴我insert與vector間的molar ratio大概是多少
: : 我已經試過許多比例了...@@
: : 謝謝大家
: 大小太過懸殊，沒有比較容易接，
: 而且也不容易跑膠看有沒接上
: 可以先跟小一點（幾百bp）的先接完
: 再接到vector上
: (20~50ng vector x kb size of insert / kb size of vector) x insert:vector
: molar ratio (3:1或6：1) = ng of insert
: vector的量不用太多，molar ratio這兩個比例一直做得很好，供你參考
我之前做過也是將一段約50 bp的insert接到約5kb的vector上
試了很多不同比例後
覺得約5:1~10:1都可以
但重點是 把所有長出來的clone都挑來做 PCR (數量不會多到上百個)
一定可以找到有ligation的
(我用的是 Invitrogen Zero blunt TOPO cloning kit)
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◆ From: 61.222.3.155
1F：推 philesazumi:colony...株落 02/11 18:40
2F：推 turtle24:嗯..每個colony可以算是一個single clone吧?? 02/11 19:07
3F：推 tin0101:是single clone沒錯.我用會沒接近去就會自殺的vector.好用 02/11 21:32
4F：→ tin0101:只要有長的colony就是有接進去的.命中率大約8-9成 02/11 21:34
5F：推 philesazumi:我老闆說要用blue-white，只因為會自殺的他沒做過 02/11 22:23
6F：→ Adler:謝謝你~我會再試試看^^ 02/12 20:39