※ 引述《lucidol (台北-淡水)》之銘言： : 各位前被大大您們好 : 之前實驗室都是專門做關於E. coli與yeastDNA以及蛋白質表現方面. : 但是突然老師要我做抽取RNA來做PCR : 目前面臨問題是.因為實驗室裡學長姊沒做過RNA相關實驗. : 老師也不是很清楚.問東問西找資料然後叫我找資料跟他討論 : 討論之後老師他本人解釋很怪很疑惑也很不確定.所以想請問有過RNA的前輩解惑 : 我想問的問題是: : 1.實驗室沒專門做RNA的實驗桌及儀器(ex.離心機).老師跟我說用水擦一擦再用70 %ETOH : 清理過就可以操作RNA實驗.這樣的做法可行與否? 我也是抽yeast的RNA 抽的時候戴口罩和手套 盡量少講話和摸來摸去的 實驗桌和儀器我們也沒有分開 用的時候把桌子整理乾淨 可以貼一張乾淨的防污紙 或是用70％酒精擦一下 : 2.關於Tip,實驗室沒有新的tip盒,只有舊的.老師叫我把他一樣用水跟酒精交互清洗. : 就可以插tip去滅菌.贓贓的tip盒用這樣處理方式可以把RNase除去嗎?(實驗室的Tip : 是沒有棉花濾膜那一種) 建議你用乾淨一點的tip盒 舊的也沒辦法 但是盡量乾淨囉 插tip的時候用火焰消毒過的鑷子插 不要碰到tip尖端 然後滅菌至少40分鐘 : 3.關於pipette,老師也是叫我用水跟酒精交互擦拭做初步清潔,但我是想問用很久的 : pipette內部空腔不是都贓贓的容易污染?要怎麼清理內部減少RNase污染?用棉花 : 棒清在直接高壓高溫滅菌? 基本上pipette內部應該一年校正的時候會幫你做內部清潔 所以如果操作沒有問題的話還好啦 用酒精擦拭一下不太會有污染的問題 : 4.操作過程中所使用的藥品,是不是都需要在RNase-Free場所配置?配置藥品所需用到水 : 應該是拿DEPC-ddw吧?老師是跟我說像是phenol/chloroform拿抽DNA的那個來用就可以, : 這樣ok嗎?我很質疑他說的這一句 配置的過程是不需要在RNase-free的場所配 但所有需要用的水通常都是DEPC水 有些可以配完再加DEPC處理再滅菌 另外 我們實驗室是用TRIZOL抽RNA 如果你是用phenol-chloroform的話 phenol的pH值和DNA用的不一樣喔 chloroform的話是一樣的 : 5.老師叫我用bead及acid phenol來做RNA extraction,那bead要怎麼處理去污染阿? : 用來裝的eppendorf要怎麼做預處理去除RNase?是直接滅菌?? 我們實驗室的beads有分兩種 大(3mm)的是用清潔劑洗乾淨後泡0.2N NaOH 20' 然後再用一次水洗淨 二次水潤洗 烘乾之後滅菌 小(0.2mm)的是買處理好的 所以直接滅菌就好 至於eppendorf和tip就是用全新未開封的 裝的容器盡量也是新的乾淨的 如果你怕的話 你也可以先用NaOH處理過 但要記得NaOH一定要洗乾淨 其他所有在RNA實驗要用到的東西 比如說電泳槽之類的 也要先用NaOH處理過喔 也可以用3%雙氧水處理10' : 6.實驗過程中可能會碰到冰箱跟離心機,我戴手套然後再碰這兩個器材會不會因為其 : 他人沒戴手套就這樣把RNase附著到手套上面進而污染我的東西?(實驗室沒專門用 : RNA的冰箱,離心機以及場所) 你可以換手套 換下來的手套可以留著給DNA實驗用 這樣也不會太浪費 : 目前我只想到一些疑問,請各位前輩不令指教 謝謝 -- 歡迎參觀我的瓜瓜小舖 http://www.wretch.cc/album/lindayeh2 裡頭有低調奢華風的耳環 還有復古風的耳環、髮飾 還有還有 今年最in的毛線髮夾 跟永遠不會褪流行的水鑽系列耳環及髮飾喔 歡迎大家告訴大家 一定要來瓜瓜小舖光顧一下喔^^ 所有東西都是限量供應 賣完就沒了 先搶先贏～ 大家要把握機會喔^^ --

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