作者lucidol (台北-淡水)
看板Biotech
標題[問題] 抽取RNA相關問題
時間Sat Jan 27 02:05:45 2007
各位前被大大您們好
之前實驗室都是專門做關於E. coli與yeastDNA以及蛋白質表現方面.
但是突然老師要我做抽取RNA來做PCR
目前面臨問題是.因為實驗室裡學長姊沒做過RNA相關實驗.
老師也不是很清楚.問東問西找資料然後叫我找資料跟他討論
討論之後老師他本人解釋很怪很疑惑也很不確定.所以想請問有過RNA的前輩解惑
我想問的問題是:
1.實驗室沒專門做RNA的實驗桌及儀器(ex.離心機).老師跟我說用水擦一擦再用70 %ETOH
清理過就可以操作RNA實驗.這樣的做法可行與否?
2.關於Tip,實驗室沒有新的tip盒,只有舊的.老師叫我把他一樣用水跟酒精交互清洗.
就可以插tip去滅菌.贓贓的tip盒用這樣處理方式可以把RNase除去嗎?(實驗室的Tip
是沒有棉花濾膜那一種)
3.關於pipette,老師也是叫我用水跟酒精交互擦拭做初步清潔,但我是想問用很久的
pipette內部空腔不是都贓贓的容易污染?要怎麼清理內部減少RNase污染?用棉花
棒清在直接高壓高溫滅菌?
4.操作過程中所使用的藥品,是不是都需要在RNase-Free場所配置?配置藥品所需用到水
應該是拿DEPC-ddw吧?老師是跟我說像是phenol/chloroform拿抽DNA的那個來用就可以,
這樣ok嗎?我很質疑他說的這一句
5.老師叫我用bead及acid phenol來做RNA extraction,那bead要怎麼處理去污染阿?
用來裝的eppendorf要怎麼做預處理去除RNase?是直接滅菌??
6.實驗過程中可能會碰到冰箱跟離心機,我戴手套然後再碰這兩個器材會不會因為其
他人沒戴手套就這樣把RNase附著到手套上面進而污染我的東西?(實驗室沒專門用
RNA的冰箱,離心機以及場所)
目前我只想到一些疑問,請各位前輩不令指教 謝謝
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◆ From: 220.132.182.103
1F：推 ROKEE:我會建議你實際去有在RNA操作的實驗室走一趟,這樣比較快上手 01/27 05:30
2F：推 enisx:先把版上關於"RNA" 的討論文章全看過一遍,再翻翻書應該會有 01/27 09:13
3F：→ enisx:點心得, 正式要作前,找個有經驗的人帶你或是如樓上說的,去 01/27 09:14
4F：→ enisx:平常有在抽RNA的lab見習一下吧! 01/27 09:15
5F：推 Nicoleching:嗯 只能說 我從來沒做過以上去污染的動作...抽的出來ꨠ 01/27 13:21
6F：→ Nicoleching:就是抽的出來... 頂多滅滅菌帶口罩... 01/27 13:22
7F：推 AcSn:我們lab也沒有專門做RNA但要抽RNA前就都滅菌50分一直都ok 01/27 13:41
8F：→ AcSn:最多水會經過DEPC處理過滅菌再用囉~ 01/27 13:43
9F：→ ceci:滅菌機的高溫 確實可以去除RNase活性 01/27 22:05
10F：→ ceci:小心處理Eppendorf外壁上的RNase也不會進到裡面 畢竟它有蓋子 01/27 22:06