作者keiny (lav dolce vita(分生所))
看板Biotech
標題[問題] 請問有人做過 in vitro trascription & translation 嗎?
時間Wed Jan 17 03:03:44 2007
Q1: 有大大做過這個實驗嗎?
我想請教其中的細節
Q2: 還是有其他更適合的方法
(看unmodified form proetin 之 expression 情形)
{前情概要}
小弟正在做這個實驗(In vitro transcription & translation)中
http://www.promega.com/pnotes/60/6079_07/promega.html
目的: 要看在很少modification的環境下
我的protein的表現情形
(註) 我是用S35-Met label 的
我要表現的DNA (約1800bp) construct在pet15b的vector中
因為它有T7 promoter
手邊又剛好有
http://www.genomex.com/vector_maps/pet15bm.pdf
{慘狀}
不過我照著protocol做了幾次 壓了幾次片子
都沒有看到我想看的protein !!
只有一些background band(compare with control:沒有放入任何DNA的Reaction !!)
懇請諸君給予建議
感激不盡~~~~
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.32.9
1F：推 nightcatman:我用Roche的做過,按照說明書一次成功,不過Roche的很貴 01/17 08:07
2F：推 lolity:Kit裡面應該有提供control plasmid，先確定不是kit的問題。 01/17 09:08