懸浮細胞不建議用Calcium Phosphate Transfection 因為顆粒會沉澱 所以是貼附型的細胞效果好 Calcium Phosphate Transfection適用細胞其實不多(以下簡稱CP好了) 你可以去翻翻Current protocol 我印象中裡面寫蠻多的 通常最好用的是293T細胞 效率好的話我有到九成 不過是GFP啦 CP的方式其實效果variation很大 這不但是我的經驗 也是Current protocol上寫的 而且 我看你的方式 像是抄書上的 但書上的方式其實太傳統 效果不見得好 反而是各實驗室改良的Mix方式 效果會好很多 至於勉強用在懸浮細胞上 我幹過 我養的細胞也是會有些貼在dish上 也嘗試過去做CP transfection 當時若以293T為目標的效果可以到9成 但勉強以懸浮細胞做 GFP當control沒一顆細胞是亮的 後來我發現我的細胞在HBSS中培養會全部貼在dish上 於是我興奮的再做CP transfection 細胞全碎 除此之外 我們實驗室曾拿過很多種細胞做CP transfection 校果大多沒293T好 而且大部分都是很差(頂多4成) (Hela, Caski, H1299等) 不過如果你的plasmid可以用藥篩或許沒差 總之 不建議你試 尤其是懸浮細胞 效果奇差 硬要試的話 顆粒大小 換medium的時間都可以調 我加入CP plasmid Mix到細胞medium中 最短一個小時就換medium(complete) 第二天效果仍有7成 不過是293T就是 有的細胞很脆弱 兩個小時換就死光光了 還有 有的書上說 Serum會影響transfection效率 雖然我覺得沒差 最後 書上都寫 Mix CaCl 和 HBS後要等幾十分鐘 其實...........我做到最後的經驗是 根本不用等 顆粒細才是王道 不過 這東西真的很詭異 到各個實驗室的結果都不大一樣 我也有看過其他實驗室做出比我大十倍有的顆粒 細胞沒死 效果也很好 真是天殺的不知所以然 光transfection我就試了好幾個月 兩年下來 我對這方法還是一整個不喜歡 即使在熟悉的實驗室 用同樣的buffer medium 我都不能保證我每一次細胞都不會碎 也許是我們的方法也不好吧 只能說 原po得多試多問了 --

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