唔...我的實驗現在卡在蛋白質的expression和純化已經有一段時間了... 我先說明一下現在實驗的狀況跟目的好了.... 希望有前輩能指點我過程是否有問題 我的實驗是要將表現某蛋白質的基因transformation到E.coli 利用E.coli表現蛋白質 並純化此蛋白質作為疫苗使用 蛋白質大小約48kD 表現載體為Promega的pGEMEX 利用T7 polymerase進行表現 E.coli strain 是BL21(DE3）...如果學長沒說錯的話... Induce 3hr後 收菌液離心 接著PBS重新懸浮後 用超音波破菌 離心 收上清液和沈澱 跑SDS-PAGE後 確定了我的蛋白質在沈澱中（inclusion body） 基本上到這裡應該沒甚麼問題... 因為我的蛋白質是單純要打老鼠用的 暫不在乎蛋白質的folding正確與否 另外我希望能純化出多量且較純的蛋白質 所以我想直接純化inclusion body來得到我的蛋白質 我在網路上收集一些純化inclusion body的方法（都找到wash的方法..） 最後我用wash的方法作純化 buffer成份為： buffer1：0.5% Triton X100; 50mM Tris-HCl pH8; 100mM NaCl; 0.1% sodium azide buffer2：成份一樣 僅不含triton X100 步驟為：以buffer1再懸浮清洗pellet，離心18000Xg，20min，4度C 重複四次 再以buffer2洗過以去除triton X100，離心後保存pellet 原步驟最後會用8M Urea去溶pellet 可是當我這樣作 之後SDS-PAGE跑出來結果非常的醜...而且根本不能判斷結果... 所以我只用PBS沖起pellet就拿去跑SDS-PAGE （有99度煮過） 現在問題來咧.... SDS-PAGE的結果 我要的蛋白質的確還在 且明顯的除掉了其他的proteins 但是...gel上卻有兩條bands 大小相近...我以7.5%的gel要跑到最底才分的明顯... 估計應該46kD左右吧... 另外濃度都還蠻相近的（從染色上看來...） 我想了解另一條蛋白質是甚麼、會不會影響實驗 才知能否利用這些純化出來的蛋白質... 所以...一條是我的...另外一條約46kD左右...會是甚麼呢？@@ 會是E.coli的蛋白質嗎？ 還是我的蛋白質folding的問題？？不過跑SDS-PAGE煮過應該不至於吧...?? 另外我考慮到的是vector的關係嗎？ 還是整個純化步驟少了些甚麼...？ 希望有經驗或了解inclusion body純化的人能指點我><" 或者可以提供其他純化的potocol讓我參考（wash或surcose gredient超高速離心法都可） 希望可以幫幫我!!如需要補充其他流程或狀況的 我會在補充 在此先感謝了!! --

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