作者skylawer (skylawer)
看板Biotech
標題Re: [問題] 請問PCR Full-length cDNA ?
時間Thu Dec 28 21:21:51 2006
※ 引述《mandible》之銘言：
: PCR很多次了
: 還是P不出來
: 感覺primer dimer很明顯?
: 請問高手有哪些方法?可以教導我!!
: 我的條件是
: 94度C-1mins
: 45度C-2mins
: 72度C-3mins
: 跑36 cycles
: pcr product大概是784bp(我知道很短)但是就是跑不出來!
: 用的是taq proofreading enzyme (因為要送去定序)
: 大概是這樣!x
假設 PCR 基本常識中 (Tm, DMSO, hot start....等等) 該試的都試過了
如果你是從 cDNA or genomic DNA amplify
要減少 primer dimer 的小方法你可試試
將你的mixture 分兩管
每管先加其中一個primer 進行amplify
大約進形5~10 個 cycle 在將兩管 mix 起來繼續 amplify...
原理很簡單 我想你推敲一下就瞭解了
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◆ From: 140.109.64.75
1F：→ mandible:這個方法我會試試看!!謝謝您~~ 12/28 22:06
2F：推 oplz:primer dimer 也有可能是同一種 primer 形成 dimer .. 12/29 00:09
3F：推 skylawer:所以也只能試試囉..不過此法在 site direct 突變頗有效.. 12/29 01:11