※ 引述《shuo218 (快樂的理由)》之銘言： : 最近在抽plasmid 因為我們實驗室是第一次接觸細菌的實驗 : 雖然照protocol下去做 可是抽完的濃度都少的可以 : 下面是我的protocol 還麻煩大家可以幫我解決這個問題 : 1 colony of successfully pGL-transformed E.Coli to 10ml prewarmed LB+ (in tube) : Incubate o/n (16H) 37°C 60rpm : 一次培養2管，然後將兩管倒在一起成20ml : Centrifuge the 20ml culture at 10,000g x 5min : 接下來的步驟都是照promega的protocol做的 : 不過最後我們是用40ul回溶 因為上次用100ul覺得量太少 : 結果今天做出來量更少 大概只有0.0125 ug/ul : 實在不知道是哪邊出問題 : 因為後面要切 然後ligase 回收 再送到E.coli : 可是前面的量就很少 後面好像根本就沒辦法做下去 : 大家有什麼好的方法嗎?謝謝!! 我不知道你的實際情形為何， 像我之前做過有點詭異的一次也是類似你的情形， （我使用的是QUIGEN出的mini-prep） 一開始我以為會不會是該vector為low copy number 但應該不可能，因為該vector就是賣來做cloning的... 所以我想說就將養久一點... 並且狠了心給他放大兩次... 但結果同樣不好。 後來， 跟隔壁實驗室討論的結果， 想說有沒有可能因為我們拿這個vector並沒有用該公司所提供的菌種， 而是用我們自己實驗是的competent cell... 可能細胞不喜歡該vector...-_-" 因此該公司隨著kit賣的competent cell重新transform... 這次沒有放大、沒有加大LB量， 自然產量就很OK.... 另外在操作的時候， 一些小動作也會影響（我認為啦） 像是學姐叫我說將細胞離心下來後， 先用殘留在試管的溶液將細胞resuspend， 再加上solution I， 但是我自己操作的時候則是將solution I加入後再與pallet一起resuspend... 至少測出來的OD就比學姐做的好多...-_-" 總之～good luck... --

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