作者WinnieDad (小熊維尼的天才老爹)
看板Biology
標題[問題] 請教一個關於intron loss的問題
時間Tue Feb 15 11:22:06 2011
【問題】：已定序的intron loss event，可否僅是PCR時amplified到被轉譯的基因
片段，而非真正的lost intron
【問題起因】：小弟於研究中發現到幾個intron loss events並且得到該intron完全
切除的定序結果，為之興奮不已。但是有教授質疑此結果可能是我做
PCR時複製到剛好已完成轉譯的片段。
【個人看法】：由於整個DNA extraction過程中都有小心做RNase處理，理論上應該
不會發生轉譯完成的mRNA存在又被RT成cDNA後在PCR時增幅。另外；
跑膠的結果也都只有單一條cDNA size的band而已，如果是教授所說
的情況發生，應該會看到原本的基因片段和無intron的片段兩條bands
同時存在。我用以上這兩點解釋時是蠻有信心的，可是教授一直在奸
笑，笑的我心發寒…
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◆ From: 140.116.16.202
※ WinnieDad:轉錄至看板 Biotech 02/15 11:22
1F：推 vixen:那你就真的純化RNA+RT再PCR來證明如此產物的size不一樣 02/16 12:18
2F：→ WinnieDad:問題是理論上來說應該一樣，由於這段intron是完整遺失， 02/16 15:43
3F：→ WinnieDad:所以如果我直接PCR cDNA，會得到一樣的size。 02/16 15:44
4F：推 vixen:那你就比較1F實驗與你原先的實驗, PCR出來的"量"差異. 02/17 12:59
5F：→ nsysuistyle:DNA---->RNA 不是應該叫轉錄(Transcription)嗎 03/04 21:03