作者WinnieDad (小熊维尼的天才老爹)
看板Biology
标题[问题] 请教一个关於intron loss的问题
时间Tue Feb 15 11:22:06 2011
【问题】：已定序的intron loss event，可否仅是PCR时amplified到被转译的基因
片段，而非真正的lost intron
【问题起因】：小弟於研究中发现到几个intron loss events并且得到该intron完全
切除的定序结果，为之兴奋不已。但是有教授质疑此结果可能是我做
PCR时复制到刚好已完成转译的片段。
【个人看法】：由於整个DNA extraction过程中都有小心做RNase处理，理论上应该
不会发生转译完成的mRNA存在又被RT成cDNA後在PCR时增幅。另外；
跑胶的结果也都只有单一条cDNA size的band而已，如果是教授所说
的情况发生，应该会看到原本的基因片段和无intron的片段两条bands
同时存在。我用以上这两点解释时是蛮有信心的，可是教授一直在奸
笑，笑的我心发寒…
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.16.202
※ WinnieDad:转录至看板 Biotech 02/15 11:22
1F：推 vixen:那你就真的纯化RNA+RT再PCR来证明如此产物的size不一样 02/16 12:18
2F：→ WinnieDad:问题是理论上来说应该一样，由於这段intron是完整遗失， 02/16 15:43
3F：→ WinnieDad:所以如果我直接PCR cDNA，会得到一样的size。 02/16 15:44
4F：推 vixen:那你就比较1F实验与你原先的实验, PCR出来的"量"差异. 02/17 12:59
5F：→ nsysuistyle:DNA---->RNA 不是应该叫转录(Transcription)吗 03/04 21:03