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標 題Re: [問題] restriction enzyme
發信站中興天樞 (Sat Nov 24 08:31:05 2007)
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※ 引述《[email protected] (kitty)》之銘言：
> 可能對板上的專家而言是個太簡單的問題
> 但如果大家願意幫忙回答的話
> 小女子會感激不盡的！
> 【問題】：請問restriction enzyme的三種型分別特性為何？
> 他們為什麼可以做DNA Cloning？
> 【問題起因】：是老師一時興起出的作業啦！
> 我要後天才有空進圖書館
> 在這之前先上網路查查摟！
> 【個人看法】：目前查到的資料都說用的最普遍的是type II
> 其他的內容都太太太深奧了
> 哪位好心人可以用淺顯易懂的話解釋一下呢？
> 感謝感謝！
RE的三種型態：
1. 5'-protruding end (5'-phosphate extension)
如： FcoRI 5'-
G-A-A-T-T-C-3'
3'-
C-T-T-A-A-G-5'
2. 3'-protruding end (3'-hydroxyl extension)
如： PstI 5'-
C-T-G-C-A-G-3'
3'-
G-A-C-G-T-C-5'
3. blunt end
如：PvttII 5'-
C-A-G-C-T-G-3'
3'-
G-T-C-G-A-C-5'
通常將DNA cloning有兩種方式：
1. Cell-based DNA cloning 剪裁DNA與vector黏接，之後送進細菌，常為大腸桿菌
2. Cell-free DNA cloning (PCR) 不經由生物方式將單一片段放大
Type of restriction enzyme
(type II)簡介：
1. Cut DNA at defined positions close to or within their recognition
sequences.
認位與切位位置相近
2. Produce discrete restriction fragments and distinct gel banding patterns.
具有乾淨的切位
3. Are the only class used in the laboratory for DNA analysis and gene
cloning.
最常使用的RE種類
4. Tend to be small, with subunits in the 200-350 amino acid range.
5. Require only magnesium for activity and the coresponding modification
enzymes require only adenosylmethionine.
需要鎂離子作為 cofactor 才有作用
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