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标 题Re: [问题] restriction enzyme
发信站中兴天枢 (Sat Nov 24 08:31:05 2007)
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※ 引述《[email protected] (kitty)》之铭言：
> 可能对板上的专家而言是个太简单的问题
> 但如果大家愿意帮忙回答的话
> 小女子会感激不尽的！
> 【问题】：请问restriction enzyme的三种型分别特性为何？
> 他们为什麽可以做DNA Cloning？
> 【问题起因】：是老师一时兴起出的作业啦！
> 我要後天才有空进图书馆
> 在这之前先上网路查查搂！
> 【个人看法】：目前查到的资料都说用的最普遍的是type II
> 其他的内容都太太太深奥了
> 哪位好心人可以用浅显易懂的话解释一下呢？
> 感谢感谢！
RE的三种型态：
1. 5'-protruding end (5'-phosphate extension)
如： FcoRI 5'-
G-A-A-T-T-C-3'
3'-
C-T-T-A-A-G-5'
2. 3'-protruding end (3'-hydroxyl extension)
如： PstI 5'-
C-T-G-C-A-G-3'
3'-
G-A-C-G-T-C-5'
3. blunt end
如：PvttII 5'-
C-A-G-C-T-G-3'
3'-
G-T-C-G-A-C-5'
通常将DNA cloning有两种方式：
1. Cell-based DNA cloning 剪裁DNA与vector黏接，之後送进细菌，常为大肠杆菌
2. Cell-free DNA cloning (PCR) 不经由生物方式将单一片段放大
Type of restriction enzyme
(type II)简介：
1. Cut DNA at defined positions close to or within their recognition
sequences.
认位与切位位置相近
2. Produce discrete restriction fragments and distinct gel banding patterns.
具有乾净的切位
3. Are the only class used in the laboratory for DNA analysis and gene
cloning.
最常使用的RE种类
4. Tend to be small, with subunits in the 200-350 amino acid range.
5. Require only magnesium for activity and the coresponding modification
enzymes require only adenosylmethionine.
需要镁离子作为 cofactor 才有作用
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