不用太氣餒 這樣的 material and method 就我看起來寫得實在很差 XD 另外對讀原文 paper 的一個建議是 未必需要先把文章 "翻譯" 然後在想辦法看懂 入門的方法 最好是先一句一句看懂以後 用中文的語法把原文的意思寫出來就好 另外 一些專門的名詞其實我是不建議刻意去翻成中文的 ※ 引述《[email protected] (1/2倒數)》之銘言： > 瞬時轉染和雙螢光素?分析 (打不出來一直出現問號= =) > Transient transfections and dual luciferase reporter assays > T47D cells were subcultured with 0.56x10^5/well cells in 24-well plates 1 day > before transfection. > 這段是說T47D乳癌細胞株再轉染前先次培養在24well的plate 1天,每個well要有 > 0.5x10^5? 意思對了 不過我會把他寫得像中文一點，而且盡量把長句型拆開： 在 transfect 前一天 把 T47D 細胞 以每個 well 5.6x10^4（原文的表示法好怪）的密度 種到 24 well 的 plate 上 > Fugene 6 was used to transfect T47D cells with both > 0.19 mg/well of a plasmid containing Firefly-LUC under the regulation of > three copies of HRE from the PGK-1 gene (OB-HRE) and a minimal > Simian virus 40 (SV40) promoter and 0.01 mg/well of pRL SV40 (which > contains an SV40-driven Renilla LUC construct) as an internal control to > normalise the Firefly-LUC expression according to the manufacturer’s > instructions. > 根據廠商的指示3個HRE的複製品:PGK-1 gene,最小的SV40啟動子和0.01mg/well的pRL SV4 > 當作實驗室內部control去 ????? Firefly-LUC的表現 > 以fugene6轉染T47D乳癌株細胞,plasmid嵌入Firefly-LUC 這句原文就很爛 拆開來比較好懂： 用 Fugene 6 這種藥劑來 transfect 前述的 T47D 細胞 每個 well 用了 0.19mg 的含有 Firefly-LUC 的 plasmid 還用了 0.01mg 的 pRL SV40 前面說的那個含有 Firefly-LUC 的 plasmid, 其 Firefly-LUC 是被 三份從 PGK-1 gene (OB-HRE) 而來的 HRE 以及 SV40 promoter 的最小（有效）部分 所調控的 至於前面說的那個 pRL SV40 則又含有被 SV40 調控的 Renilla LUC 這個 pRL SV40 是作為 internal control 要 internal control 是為了要 normalize Firefly-LUC 的強度 上面所述都是乖乖按照原廠只指示 > Following 12 h transfection and 24 h serum starvation, cells > were either incubated in the presence or absence of bFGF (10 ng/mL) for 6, > 18, or 24 h under normoxic or hypoxic conditions, respectively, or > pretreated with PD98059 (20 mM) or LY294002 (20 mM) for 20min before > exposure to hypoxia in the presence or absence of bFGF (10 ng/mL) for > 18 h. > 接著12小時的轉染和24小時的serum starvation,在有氧或缺氧的情況下細胞培養， > 存在或缺乏bFGF 6,18,24小時 > 在暴露在缺氧再存在或缺乏bFGF前以PD98059或LY294002前處理20分 在 12 小時的 transfection 以及 24 小時不給血清的培養條件以後 在有氧或缺氧，存在或乏 bFGF 的情況下進行培養達 6,18,24 小時 或者是 先以 PD98059 (20 mM) or LY294002 (20 mM) 處理二十分鐘以後 才放到缺氧，存在或乏 bFGF 的情況下進行培養達 18 小時 > Whole cell lysates were collected and a luciferase assay was performed > using the luciferase assay system from Promega following the manufacturer’s > procedure. Results were quantified with a MicroBeta luminescence counter. > 最後一段翻譯到氣餒了.......... > 對不起..我真的不行了 看不懂啦..以前沒學過過 也沒有跟實驗上網查知到了轉染是將DNA送進細胞的 > 方法但實在沒辦法將文章跟轉染連結在一起...請看的懂得人幫忙翻一下..感激不盡 收集 Whole cell lysates （把整 well 的細胞打爛，所有東西都收集起來，詳情可以另查相關 protocol） 拿去作魔王路西法酵素分析（誤很大...） 這個路西法酵素分析系統是 Promega 這家公司的 流程都乖乖聽該公司的話 結果偷過 MicroBeta luminescence counter （儀器名）計量 -- And my soul from out that shadow that lies floating on the floor 在那地板上浮動的影子中的我的靈魂 Shall be lifted- nevermore! 將永不再起... --The Raven by E.A.Poe -- ※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> ◆ From: cpe-66-61-25-1.neo.res.rr.com