不用太气馁 这样的 material and method 就我看起来写得实在很差 XD 另外对读原文 paper 的一个建议是 未必需要先把文章 "翻译" 然後在想办法看懂 入门的方法 最好是先一句一句看懂以後 用中文的语法把原文的意思写出来就好 另外 一些专门的名词其实我是不建议刻意去翻成中文的 ※ 引述《[email protected] (1/2倒数)》之铭言： > 瞬时转染和双萤光素?分析 (打不出来一直出现问号= =) > Transient transfections and dual luciferase reporter assays > T47D cells were subcultured with 0.56x10^5/well cells in 24-well plates 1 day > before transfection. > 这段是说T47D乳癌细胞株再转染前先次培养在24well的plate 1天,每个well要有 > 0.5x10^5? 意思对了 不过我会把他写得像中文一点，而且尽量把长句型拆开： 在 transfect 前一天 把 T47D 细胞 以每个 well 5.6x10^4（原文的表示法好怪）的密度 种到 24 well 的 plate 上 > Fugene 6 was used to transfect T47D cells with both > 0.19 mg/well of a plasmid containing Firefly-LUC under the regulation of > three copies of HRE from the PGK-1 gene (OB-HRE) and a minimal > Simian virus 40 (SV40) promoter and 0.01 mg/well of pRL SV40 (which > contains an SV40-driven Renilla LUC construct) as an internal control to > normalise the Firefly-LUC expression according to the manufacturer’s > instructions. > 根据厂商的指示3个HRE的复制品:PGK-1 gene,最小的SV40启动子和0.01mg/well的pRL SV4 > 当作实验室内部control去 ????? Firefly-LUC的表现 > 以fugene6转染T47D乳癌株细胞,plasmid嵌入Firefly-LUC 这句原文就很烂 拆开来比较好懂： 用 Fugene 6 这种药剂来 transfect 前述的 T47D 细胞 每个 well 用了 0.19mg 的含有 Firefly-LUC 的 plasmid 还用了 0.01mg 的 pRL SV40 前面说的那个含有 Firefly-LUC 的 plasmid, 其 Firefly-LUC 是被 三份从 PGK-1 gene (OB-HRE) 而来的 HRE 以及 SV40 promoter 的最小（有效）部分 所调控的 至於前面说的那个 pRL SV40 则又含有被 SV40 调控的 Renilla LUC 这个 pRL SV40 是作为 internal control 要 internal control 是为了要 normalize Firefly-LUC 的强度 上面所述都是乖乖按照原厂只指示 > Following 12 h transfection and 24 h serum starvation, cells > were either incubated in the presence or absence of bFGF (10 ng/mL) for 6, > 18, or 24 h under normoxic or hypoxic conditions, respectively, or > pretreated with PD98059 (20 mM) or LY294002 (20 mM) for 20min before > exposure to hypoxia in the presence or absence of bFGF (10 ng/mL) for > 18 h. > 接着12小时的转染和24小时的serum starvation,在有氧或缺氧的情况下细胞培养， > 存在或缺乏bFGF 6,18,24小时 > 在暴露在缺氧再存在或缺乏bFGF前以PD98059或LY294002前处理20分 在 12 小时的 transfection 以及 24 小时不给血清的培养条件以後 在有氧或缺氧，存在或乏 bFGF 的情况下进行培养达 6,18,24 小时 或者是 先以 PD98059 (20 mM) or LY294002 (20 mM) 处理二十分钟以後 才放到缺氧，存在或乏 bFGF 的情况下进行培养达 18 小时 > Whole cell lysates were collected and a luciferase assay was performed > using the luciferase assay system from Promega following the manufacturer’s > procedure. Results were quantified with a MicroBeta luminescence counter. > 最後一段翻译到气馁了.......... > 对不起..我真的不行了 看不懂啦..以前没学过过 也没有跟实验上网查知到了转染是将DNA送进细胞的 > 方法但实在没办法将文章跟转染连结在一起...请看的懂得人帮忙翻一下..感激不尽 收集 Whole cell lysates （把整 well 的细胞打烂，所有东西都收集起来，详情可以另查相关 protocol） 拿去作魔王路西法酵素分析（误很大...） 这个路西法酵素分析系统是 Promega 这家公司的 流程都乖乖听该公司的话 结果偷过 MicroBeta luminescence counter （仪器名）计量 -- And my soul from out that shadow that lies floating on the floor 在那地板上浮动的影子中的我的灵魂 Shall be lifted- nevermore! 将永不再起... --The Raven by E.A.Poe -- ※ Origin: 生命科学 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> ◆ From: cpe-66-61-25-1.neo.res.rr.com