看板Biology
標 題Re: 關於萃取plasmid DNA的問題
發信站木棉樹 (Tue Jul 18 00:35:23 2006)
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※ 引述《[email protected] (shingo)》之銘言：
> ※ 引述《[email protected] (想以玫瑰祭妳。)》之銘言：
> : 有點看不懂你表達的
> : 酒精Wash完後以TE溶掉DNA pellet,再沉澱DNA??
> : 是要re-salting out嗎?
> : 再說請楚點你的問題吧~ TE溶掉DNA後沒做特殊處理怎麼得到pellet..
> 加完TE後，還有加RNase A，然後再加1.6M NaCl放4度C讓它沉澱overnight，但隔天
> 再以top speed離心後，卻完全看不到pellet
一般若是要再沉澱的原則是:
5M NaCl加1/10體積
再加2倍體積的絕對酒精
我覺得你TE裡若只加鹽而不加酒精(或isopropanol),當然看不到pellet
試試看吧,我是沒出問題過(前提是你的DNA不能少到看不到)
記得加完酒精後,一定要搖均勻喔,不然-80也沉不出來
另外,建議放到至少-20以下做沉澱動作~
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