看板Biology
标 题Re: 关於萃取plasmid DNA的问题
发信站木棉树 (Tue Jul 18 00:35:23 2006)
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※ 引述《[email protected] (shingo)》之铭言：
> ※ 引述《[email protected] (想以玫瑰祭你。)》之铭言：
> : 有点看不懂你表达的
> : 酒精Wash完後以TE溶掉DNA pellet,再沉淀DNA??
> : 是要re-salting out吗?
> : 再说请楚点你的问题吧~ TE溶掉DNA後没做特殊处理怎麽得到pellet..
> 加完TE後，还有加RNase A，然後再加1.6M NaCl放4度C让它沉淀overnight，但隔天
> 再以top speed离心後，却完全看不到pellet
一般若是要再沉淀的原则是:
5M NaCl加1/10体积
再加2倍体积的绝对酒精
我觉得你TE里若只加盐而不加酒精(或isopropanol),当然看不到pellet
试试看吧,我是没出问题过(前提是你的DNA不能少到看不到)
记得加完酒精後,一定要摇均匀喔,不然-80也沉不出来
另外,建议放到至少-20以下做沉淀动作~
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