※ 引述《[email protected] ( )》之銘言： > 要不要測測看mycoplasma > 若是污染了...有時候會影響transfection的efficicncy > 或是target protein的表現..... > ※ 引述《[email protected] (我也很盡心)》之銘言： > > 目前我利用H1299這株細胞株作Transfection一直有問題， > > 基本上這個細胞很容易作， > > 但是internal control一直控制不好(用的是Renilla)， > > 我絕得應該是分細胞的時候分不太好啦(種在24well中)， > > 但是我已經將細胞在分之前打的很均勻了， > > 還是說作transfection還要注意哪些嗎? > > 真的漫急的，因為lipo很貴， > > 老師好像有點.......= = > > 希望有經驗的同學可以幫忙指教一下，感謝囉! Reporter assay的主要誤差可分為兩個,所以才需要internal control看客觀性 1. Individual transfection effeciency 此時從duplicate well讀值可以看出 2. Total subjected cell number 用個house-keeping cellular protein當control就可以觀察 我懷疑你Renilla的promoter是不是受到你的處理影響? 收luciferase剩下的細胞定個蛋白濃度跑個western看看 用beta-actin or GAPDH當internal control 雖然你的問題還不夠明確,但我覺得你的問題大概不在於transfection本身。 參考看看囉~ (我現在常用GFP當tranfection internal control) -- →↓ Origin: 東海生物˙木棉樹 bbs.bio.thu.edu.tw ↑← Author: olin 從 211.76.173.108 發表