※ 引述《[email protected] ( )》之铭言： > 要不要测测看mycoplasma > 若是污染了...有时候会影响transfection的efficicncy > 或是target protein的表现..... > ※ 引述《[email protected] (我也很尽心)》之铭言： > > 目前我利用H1299这株细胞株作Transfection一直有问题， > > 基本上这个细胞很容易作， > > 但是internal control一直控制不好(用的是Renilla)， > > 我绝得应该是分细胞的时候分不太好啦(种在24well中)， > > 但是我已经将细胞在分之前打的很均匀了， > > 还是说作transfection还要注意哪些吗? > > 真的漫急的，因为lipo很贵， > > 老师好像有点.......= = > > 希望有经验的同学可以帮忙指教一下，感谢罗! Reporter assay的主要误差可分为两个,所以才需要internal control看客观性 1. Individual transfection effeciency 此时从duplicate well读值可以看出 2. Total subjected cell number 用个house-keeping cellular protein当control就可以观察 我怀疑你Renilla的promoter是不是受到你的处理影响? 收luciferase剩下的细胞定个蛋白浓度跑个western看看 用beta-actin or GAPDH当internal control 虽然你的问题还不够明确,但我觉得你的问题大概不在於transfection本身。 参考看看罗~ (我现在常用GFP当tranfection internal control) -- →↓ Origin: 东海生物˙木棉树 bbs.bio.thu.edu.tw ↑← Author: olin 从 211.76.173.108 发表