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標 題[問題] 請問PCR中cycle的數量與Taq用量是否有相關?
發信站KKCITY (Wed Apr 5 11:17:31 2006)
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請教各位,小弟最近用genomic DNA做RAPD增幅,
原本是設定35個cycle,
管中含有的Taq是1 unit的活性,
由於反應出來的條帶產物,
有些特別明亮,
其他則很模糊,
所以我嘗試提高到40個cycle,
Taq用量仍然沒有改變,
結果是原本模糊的條帶(1500bp以下)有稍微清楚一點,
但是仍然不夠容易做條帶的紀錄,
(我需要做統計分析所以條帶要紀錄得很清楚)
現在我想要嘗試到45個cycle,
是否需要增高Taq用量呢?
我查一下其他相關文獻,
通常都是25~35個cycle,
有文章指出若是PCR cycle數量太高,
容易出現不專一性的增幅產物,
有其他方法能在cycle維持在35個循環的前提下,
讓條帶可以清晰呈現嗎?
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