看板Biology
标 题[问题] 请问PCR中cycle的数量与Taq用量是否有相关?
发信站KKCITY (Wed Apr 5 11:17:31 2006)
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请教各位,小弟最近用genomic DNA做RAPD增幅,
原本是设定35个cycle,
管中含有的Taq是1 unit的活性,
由於反应出来的条带产物,
有些特别明亮,
其他则很模糊,
所以我尝试提高到40个cycle,
Taq用量仍然没有改变,
结果是原本模糊的条带(1500bp以下)有稍微清楚一点,
但是仍然不够容易做条带的纪录,
(我需要做统计分析所以条带要纪录得很清楚)
现在我想要尝试到45个cycle,
是否需要增高Taq用量呢?
我查一下其他相关文献,
通常都是25~35个cycle,
有文章指出若是PCR cycle数量太高,
容易出现不专一性的增幅产物,
有其他方法能在cycle维持在35个循环的前提下,
让条带可以清晰呈现吗?
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